【摘 要】
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以克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到醛还原酶的基因yqhD。将其连接到pMD 18-T载体上,得到重组质粒pMD 18-T-yqhD,对此重组质粒进
【机 构】
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大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系,辽宁大连116024
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以克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到醛还原酶的基因yqhD。将其连接到pMD 18-T载体上,得到重组质粒pMD 18-T-yqhD,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明,该基因长度为1164bp,编码387个氨基酸,与Genbank上已公布的Klebsiella pneumoniae MGH78578中yqhD相比,氨基酸序列的同源性为100％。将yqhD基因连接到表达载体pET23a(+)上,转化E.coli BL21(DE3),得到重组E.coli BL21 (DE3)(pET23a(+)-yqhD)。经SDS-PAGE分析表明,该酶在E.coli BL21(DE3)中得到了高水平表达,亚基的分子量为42.3 kD,且表达的目的蛋白胞内可溶.20℃条件下诱导12h,以3-羟基丙醛为底物,测得的粗酶比活力为1.25 U/mg,而以1,3-PD为底物时,检测不到酶活力。
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