【摘 要】
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目的：本研究通过标记探针法建立miRNAs快速、灵敏、多重的可视化检测方法.方法：以链霉亲和素标记的微孔板为反应平台,根据检测靶标miRNA序列设计标记biotin的抓取探针CP和标记FITC的检测探针DP.抓取探针CP将靶标miRNA固定到孔板上,标记FITC检测探针DP与靶标miRNA结合并间接偶联于微孔板上,anti-FITC-HRP与检测探针DP标记的FITC结合,HRP催化底物TMB显色
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院 中国军事医学科学院11所
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会
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目的：本研究通过标记探针法建立miRNAs快速、灵敏、多重的可视化检测方法.
方法：以链霉亲和素标记的微孔板为反应平台,根据检测靶标miRNA序列设计标记biotin的抓取探针CP和标记FITC的检测探针DP.抓取探针CP将靶标miRNA固定到孔板上,标记FITC检测探针DP与靶标miRNA结合并间接偶联于微孔板上,anti-FITC-HRP与检测探针DP标记的FITC结合,HRP催化底物TMB显色的作用达到定量监测靶标miRNA的作用.并且对实验中的反应条件进行优化:确定抓取探针与微孔板的最佳孵育时间,anti-FITC-HRP与标记探针的最佳孵育时间,以及靶标miRNA检测灵敏性、特异性等反应条件.
结果：CP与anti-FAM-HRP的最佳孵育时间是2小时,反应的LOD值为12.75pM,靶标序列呈阳性,其他突变序列均显示阴性.
结论：研究建立的实验方法具有灵敏度高,特异性良好等特点,并且可以同时进行多序列检测,整个检测过程可以在6小时之内完成,省时省力,具有良好的应用性,可进行大规模高通量的检测.
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