论文部分内容阅读
研究背景:白血病是常见的人类疾病,尤其是儿童和青少年,有些种类的白血病治疗还不理想,严重影响人类的健康。研究创制新的治疗白血病的药物具有重要应用价值。CMTM1是我室2004年在国际上首先克隆并报道的新基因,通过测序我们发现该基因结构复杂具有23个剪切变异体,命名为CMTM1v1-v23,v5是其中的一个变异体。实验发现过表达v5以及化学合成的v5多肽具有明显的诱导淋巴细胞来源的白血病细胞凋亡的作用,进一步研究其生物学功能,具有重要的潜在的临床应用价值。目的:研究CMTM1-v5及其多肽诱导淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用及潜在的临床应用价值。方法:运用流式细胞术结合PS外翻分析过表达CMTM1-v5引起细胞凋亡及线粒体膜电位的下降;激光共聚焦显微镜分析细胞亚定位;western bloting检测细胞色素c的释放、caspase3、9、12的切割,检测caspase-3的底物之一PA RP的切割;MTT法检测细胞的增殖。DEVDase活性检测试剂盒检测caspase的活化。在Jurkat和 Raji细胞转染后大约12小时,收获细胞提取蛋白,进行DEVDase活性(即caspase-3活性)检测,与空载体组相比,CMTM1-v5组引起细胞内caspase-3活性明显升高。由于v5分子量比较小而且没有半胱氨酸形成的二硫键,全长仅有61个氨基酸,我们通过化学合成的方法合成了v5的全长多肽,首先运用FITC标记CMTM1-V5多肽并用毛细管法进行检测,观察其是否可以直接进入细胞。接着又进行了诱导细胞凋亡实验。结果:CMTM1-v5定位于内质网,在淋巴细胞白血病来源的Jurkat和 Raji细胞中过表达CMTM1-v5可以使线粒体膜电位下降,细胞色素C的释放增加。能够非常明显的诱导细胞凋亡。CMTM1-v5可以活化caspase-3、9、12以及切割caspase-3的底物PA RP。标记FITC的CMTM1-v5多肽能够特异性的进入到淋巴细胞性白血病细胞来源的jurkat和raji细胞内,而不能进入到其他肿瘤细胞。将v5多肽加入到jurkat和raji细胞发现能够明显引起细胞凋亡。结论:CMTM1-v5及其多肽能够特异性诱导淋巴细胞白血病来源的Jurkat及 Raji细胞凋亡,CMTM1-v5多肽作为多肽合成药具有潜在的临床应用价值。