雄激素及其受体在精子发生过程中的作用及其分子机制

来源 :广东省医学会第二次生殖医学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wf1899
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大量的临床与实验研究资料表明,雄激素及其受体(Androgen receptor,AR)在精子发生过程中具有非常重要的作用。为了筛选睾丸支持细胞AR直接调控的靶基因,本实验室采用数字化表达谱测序技术(Digital gene expression sequencing),比较成年SCARKO小鼠与WT小鼠睾丸组织基因表达谱的差异,发现5141个表达差异两倍以上的基因,其中在SCARKO小鼠表达升高的基因2865个,表达下降的基因2276个;比较雄激素处理前后的小鼠睾丸支持细胞系TM4基因表达谱的差异,发现2314个差异表达两倍以上的基因,其中表达升高的基因1354个,表达下降的基因960个;比较SCARKO小鼠和雄激素处理前后的小鼠睾丸支持细胞系TM4基因表达谱的结果,两组数据中共有的基因有603个,其中受雄激素上调的基因为164个,而受雄激素下调的基因有439个。在上述研究的基础上,结合生物信息学分析技术,初步筛选出一批AR靶调控基因。采用PCR、Western blot及免疫组织化学的方法,确定了泛素结合酶2b(Ubiquitin-conjugating enzyme E2B,Ube2b)和热休克转录因子1(Heat shock transcription factor l,Hsfl)在AR特异性敲除小鼠和野生型(WT)小鼠睾丸组织中的表达差异以及雄激素对TM4细胞系中UBE2B和HSF1表达的影响;采用凝胶电泳迁移实验(EMSA)、染色质免疫共沉淀实验(ChIP assay)和双荧光素酶报告基因检测系统(Luciferase assay),确定了睾丸支持细胞Ube2b和Hsfl为AR直接调控的靶基因。
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