【摘 要】
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目的分别应用3种方法进行血浆游离DNA(Cell-free DNA,cfDNA)的提取,从而判定与筛选最佳的血浆cfDNA提取方法。方法采集19例健康人血浆标本,针对每一样本取350μl血浆分别应用
【基金项目】
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吉林省科技厅项目(20100942);吉林省科技厅项目(20082131);吉林省发改委项目(20101928);省校联合项目(20080925)
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目的分别应用3种方法进行血浆游离DNA(Cell-free DNA,cfDNA)的提取,从而判定与筛选最佳的血浆cfDNA提取方法。方法采集19例健康人血浆标本,针对每一样本取350μl血浆分别应用酚-氯仿-异戊醇法、酚-氯仿-异戊醇配合微量DNA助沉剂法和介孔纳米磁珠法3种方法进行cfDNA提取,应用紫外分光法测定提取cfDNA的含量与纯度,应用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法以提取血浆cfDNA为模板扩增GAPDH基因片段。结果应用3种方法从19例350μl血浆样本中提取的血浆cfDNA含量分别为(4709.71±2858.63)ng/ml、(9162.29±4716.43)ng/ml、(7458.57±3706.83)ng/ml,OD260/OD280值分别为1.01±0.13、1.16±0.09、0.89±0.19,GAPDH基因扩增成功率为100%。结论酚-氯仿-异戊醇配合微量DNA助沉剂法提取量大,纯度高,所提取的血浆cfDNA可以为qPCR提供模板,进行后续实验。
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