【摘 要】
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选择优良的籼稻品种9311,粤泰 B,9802S,天源6S,雁农 S,培矮64S 的成熟胚做为实验材料,进行诱导和继代试验。分别对诱导培养基和继代培养基优化:在培养基优化过程中又主要进行
【机 构】
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武汉大学生命科学学院植物发育生物学教育部重点实验室;
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选择优良的籼稻品种9311,粤泰 B,9802S,天源6S,雁农 S,培矮64S 的成熟胚做为实验材料,进行诱导和继代试验。分别对诱导培养基和继代培养基优化:在培养基优化过程中又主要进行了元素优化和激素优化。经过梯度筛选发现,在培养基其他成分不变的情况下, 采用 KNO3 35mM,NH4NO3 17mM 的浓度时,愈伤组织的诱导效率较好。在愈伤诱导过程中,NO3- 是必须的,当 NO3-降到17mM 以下时对于所测试的6个品种都不能诱导出愈伤,当诱导培养基中只加入 NO3-不加入 NH4+时能够正常地诱导出愈伤组织,所以 NO3-的浓度是除激素外启动愈伤发生的必须物质。钾离子浓度从20Mm~70mM 的范围内对诱导的质量不产生明显的影响。在继代培养基的元素优化时,采用 KNO3 35mM,NH4NO3 17mM 的浓度继代培养的效果同样比 MS 更好,不仅愈伤组织平均生长速度高出20%,而且愈伤组织的质量有较好的改善,减少了有些籼稻品种继代中的褐化现象和水化玻璃化现象。在继代培养基的优化中重点是外源激素, 籼稻在没有加入任何激素的培养基上能够生长,而且具有自发的分化出根和芽的能力;愈伤组织分化能力较强的品种恰好是那些在继代培养中容易水化死亡的品种,这可能是其内部较强的分化趋势使得其在较强的脱分化培养基上不能正常生长。在不同的2,4-D 浓度的测试中。籼稻对2,4-D 的浓度反应比粳稻敏感,当2,4-D 浓度较高(>2mg/l)很容易出现水化,玻璃化死亡;当降低2,4-D 浓度(1mg/l)时籼稻愈伤组织的水化死亡现象基本解决, 但是此时愈伤生长不够旺盛。在继代培养基中用 NAA 作为继代激素时籼稻愈伤组织可以快速地生长,完全没有任何褐化的迹象,愈伤组织生长旺盛,但是有趋于分化的现象,当再次继代时就容易死亡。刚 KT 作为继代培养基激素时,KT 是很容易导致籼稻愈伤组织褐化,当 KT 浓度为0.5mM 的时就明显地导致粤泰 B 褐化,与 NAA 的作用相拮抗。
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