【摘 要】
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ATP是机体各种生理功能所必需的高能量分子.在AMP含量的影响下,ATP与ADP以迅速转化的方式即时储存和释放能量.三者的动态平衡一旦被打破,则会影响生理活动的正常运转.因此,准确测量细胞内ATP、ADP和AMP的含量,对于了解细胞能量代谢水平、研究细胞受损或凋亡的机制等有重要意义.由于磷酸基团极性较强,使得ATP、ADP和AMP在常规C18反相色谱柱上几乎不保留.本实验室改善了采用二甲基己胺作离
【机 构】
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中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京市海淀区双清路18号,100085
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ATP是机体各种生理功能所必需的高能量分子.在AMP含量的影响下,ATP与ADP以迅速转化的方式即时储存和释放能量.三者的动态平衡一旦被打破,则会影响生理活动的正常运转.因此,准确测量细胞内ATP、ADP和AMP的含量,对于了解细胞能量代谢水平、研究细胞受损或凋亡的机制等有重要意义.由于磷酸基团极性较强,使得ATP、ADP和AMP在常规C18反相色谱柱上几乎不保留.本实验室改善了采用二甲基己胺作离子对试剂梯度洗脱的方法[1],建立使用三丁胺作离子对试剂等度洗脱的离子对色谱法对ATP、ADP和AMP进行了良好的分离.实验中采用艾捷尔MPC18色谱柱(5μm100A 2.1×150mm),流动相为8mM三丁胺和4.8mM乙酸水溶液/甲醇=62：38,检测波长为266nm.三种磷酸化合物获得较满意分离.Figure 1所示为100μM的ATP标准品溶液的色谱图,由于ATP降解等过程导致该标准品溶液中含有ADP以及AMP,且三者分离度良好.该方法可以检测到浓度为1μM的ATP,且在10μM—1mM范围内,ATP浓度与峰面积的线性关系良好,R2值为0.998.
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