【摘 要】
：
本研究通过构建MDBKCs和BMDBKCs两个样品的cDNA文库，利用Solexa高通量测序技术和生物信息学鉴定miRNA的表达谱，利用qRT-PCR技术对表达差异显著的miRNA进行验证;通过荧光显微镜观察。pBVDV感染的MDBK细胞形态变化，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;通过qRT-PC R检测cpBVDV感染的MDBK中miR-33a的表达水平;构建重组载体pMD18-MAP3K3 3’U
【机 构】
：
新疆石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003
【出 处】
：
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
论文部分内容阅读
本研究通过构建MDBKCs和BMDBKCs两个样品的cDNA文库，利用Solexa高通量测序技术和生物信息学鉴定miRNA的表达谱，利用qRT-PCR技术对表达差异显著的miRNA进行验证;通过荧光显微镜观察。pBVDV感染的MDBK细胞形态变化，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;通过qRT-PC R检测cpBVDV感染的MDBK中miR-33a的表达水平;构建重组载体pMD18-MAP3K3 3’UTR和双荧光素酶重组表达载体pmirGLO-MAP3K3 3UTR，限制性核酸内切酶SACⅠ/XHOⅠ进行双酶切鉴定并进行测序;利用Targetscan软件预测获得miR-33a的潜在靶基因并通过双荧光素酶基因检测法进行验证;通过qRT-PCR检测miR-33a NC和miR-33a mimic、转染的MDBK中miR-33a的表达水平;分别采用qRT-PCR技术和Western blot检测靶基因MAP3K3和抗凋亡基因BCL-2的转录水平以及蛋白水平;通过流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果鉴定出221个已注释miRNA、和239个新miRNA、以及miRNAs的表达谱，qRT-PCR验证结果与Solexa高通量测序结果基本一致;cpBVDV感染的MDBK细胞形态发生改变，细胞凋亡率随感染时间延长而升高;cpB-VDV感染的MDBK细胞中miR-33a的表达水平升高;获得miR-33a的靶基因MAP3K3，重组载体pMD18-MAP3K3 3UTR和双荧光素酶重组表达载体pmirGLO-MAP3K3 3 UTR构建成功，miR-33a可直接靶向MAP3K3;转染miR-33a mimics的MDBK细胞中miR-33a的表达水平随时间延长而升高;转染miR-33amimics的MDBK细胞中靶基因MAP3K3和抗凋亡基因BCL-2的转录水平和蛋白水平均显著降低;转染miR-33a mimics的细胞凋亡率明显升高。以上结果表明miRNA-33a通过靶向MAP3K3并作用于下游的抗凋亡基因BCL-2诱导MDBK细胞产生凋亡。本研究为开发针对病毒感染更高效的生物治疗方法提供了新的思路和发展前景。
其他文献
本文旨在讨论培养和激发犬对训练科目的兴奋性。主要从亲和关系、训导员情绪、强化手段、训练频率、自身体质等几方面来研究,训导员需要用心调整和激发犬的训练积极性和兴奋性，才能达到训练上事半功倍的效果。
Neonatal rat primary myocardial cells were subjected to heat stressin vitro,as a model for investigating the distribution and expression of Hsp27 and αB-crystallin. After exposure to heat stress at 42
为了系统地了解传染性法氏囊病毒TJ－hg株的发生、发展和转归的规律及其发病机理,试验通过对免疫组化条件进行摸索和筛选,建立了检测了IBDV的间接免疫组化方法。通过免疫组织化学法对人工感染鸡不同时间不同器官的分布和带毒期进行了研究。结果表明:感染1 d时,在盲肠、肝脏、心脏和肺脏中检测到IBDV-TJ-hg病毒;感染第3 d时,免疫器官和非免疫器官中均可检测到IBDV-TJ-hg病毒,但在法氏囊、脾
The 37/67-kDa laminin receptor precursor (LRP)/laminin receptor (LR) is a cell surface receptor for cellular prion proteins and misfolded pathological prions. Previous research has shown that blocking
从湖北新洲某鸡场的10日龄患病蛋鸡的腺胃里分离并鉴定一株细菌,同时对病鸡腺胃进行病理组织学观察.结果表明:该菌为革兰氏阴性杆菌,生化反应特性是对甘露醇、β-半乳糖苷酶、葡萄糖、蔗糖、α-葡萄糖、海藻糖、肌醇、山梨醇等反应阳性,对麦芽糖、吲哚、L-阿拉伯糖、D-阿拉伯糖、鼠李糖等反应阴性.通过16SrRNA核苷酸序列分析鉴定为鸭源鸡杆菌.病鸡腺胃增厚,粘膜面乳头明显,镜下粘膜上皮异常增生.分离菌药敏
构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达载体并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况,同时探讨其是否可以诱导NIH3T3细胞发生恶性转化。本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物
本研究从布鲁氏菌的外膜蛋白基因omp25基因入手，构建了缺失omp25基因的流产布鲁氏菌强毒株2308株的基因突变株，使得该菌株不能表达外膜蛋白OMP25，然后用该菌株作用其靶细胞HPT-8细胞，观察探讨缺失omp25基因的布鲁氏菌对细胞自噬的影响，为进一步研究布鲁氏菌如何通过逃逸宿主细胞的免疫杀伤作用在宿主细胞内大量生存繁殖做一些前期工作，为研制新型的布鲁氏菌疫苗做准备工作。结果表明，成功构建了
本文研究了OMP10和OMP19外膜蛋白对小鼠巨噬细胞胞内布氏小体与溶酶体融合的影响以及对其凋亡的影响，为研究布鲁氏菌外膜蛋白对其胞内生存的机制奠定基础。布鲁氏菌△omp10和△omp19具有一定的遗传稳定性，其胞内生存能力与亲本株2308相比有一定程度的下降;△omp10和△omp19与亲本株2308相比两者不能抑制小鼠巨噬细胞内布氏小体与溶酶体的融合;Domp10与亲本株2308相比不能抑制小
本项研究通过重组嗜吞噬细胞无形体的主要外膜蛋白—MSP2,MSP4，以此为抗原建立一种快速诊断人粒细胞无形体的ELISA检测方法。通过基因合成的方法合成了分别来自于瑞士的嗜吞噬细胞无形体ELSA株的MSP2基因、中国ZJ-China株的MSP4基因及美国NY18株的MSP4基因。通过生物信息学分析，筛选了MSP2,MSP4膜蛋白中包含有重要免疫决定簇的膜外区部分氨基酸作为克隆表达的目标，经过引物设
为研究结核杆菌分泌蛋白ESAT6,CFP10在细胞内与细胞凋亡之间的关系，本研究构建了ESAT6和CFP10真核表达载体，转染细胞后，分析结核杆菌分泌蛋白ESAT6和CFP10在细胞内表达时对细胞凋亡率以及凋亡相关基因的变化。本研究获得了结核杆菌ESAT6和CFP10基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-ESAT6,pEGFP-NI-CFP10;pEGFP-NI-ESAT6,pEGFP-NI-C