【摘 要】
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微流控芯片电泳分析具有体积小,试剂用量少,分离分析速度快等优点[1],已在食品安全、新药筛选、环境监测、司法鉴定等领域逐步得到应用.但由于微流控芯片分离、检测的通
【机 构】
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药用资源化学与药物分子工程重点实验室 广西师范大学化学化工学院 桂林541004
【出 处】
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第八届全国微全分析系统学术会议、第三届全国微纳尺度生物分离分析学术会议暨第五届国际微化学与微系统学术会议
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微流控芯片电泳分析具有体积小,试剂用量少,分离分析速度快等优点[1],已在食品安全、新药筛选、环境监测、司法鉴定等领域逐步得到应用.但由于微流控芯片分离、检测的通道和窗口极其微小,尽管采用灵敏的激光诱导荧光或化学发光检测,其检测灵敏度仍很难适应痕量组分的测定.核酸适配体(Aptamer)是一段DNA或RNA序列,是利用体外筛选技术—指数富集的配体系统进化技术,从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段,具有很高的分子识别能力.本文采用微流控芯片电泳激光诱导荧光检测,将芯片电泳的快速高效分离与核酸适体高效分子识别能力相结合,并引入核酸内切酶Nb.BbvCI,实现了荧光信号的循环放大,构建了一种高灵敏检测CEA的新方法.该方法原理如图所示.首先将羧基化的磁珠与氨基化的DNA 偶联,当加入目标物CEA时,CEA与其适体特异性结合,释放出互补链,该互补链与荧光素标记的信号探针杂交形成双链,由于该dsDNA上有Nb.BbvCI 的识别位点,当加入核酸内切酶Nb.BbvCI时,荧光素标记的信号探针链被切断,释放出的适体链进入循环,实现荧光信号放大.在芯片上75s内可实现对荧光素标记的信号探针与切断的探针片段分离,并通过测量探针片段的峰高,实现CEA 的检测,其检测限达0.068ng/mL,线性范围为0.13～8ng/mL,线性方程为ΔH=241.96C+3.25,R2=0.9916,其中C为ng/mL,ΔH为μV.方法已应用于健康人和癌症病人血清中CEA 的检测.具有良好的应用前景.
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