【摘 要】
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目的:根据GenBank中副猪嗜血杆菌16S rRNA基因序列,利用生物学软件Primer Express2.0设计1对特异性引物和Taqman-MGB探针,建立Taqman-MGB荧光定量PCR方法.
方法:对引物浓
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心河南郑州450008
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目的:根据GenBank中副猪嗜血杆菌16S rRNA基因序列,利用生物学软件Primer Express2.0设计1对特异性引物和Taqman-MGB探针,建立Taqman-MGB荧光定量PCR方法.
方法:对引物浓度、退火温度等反应条件进行优化,建立了Taqman-MGB探针荧光PCR标准曲线,进行灵敏度、特异性、重复性及临床应用试验.
结果:该检测方法最低检出限为10copies/μL;与普通PCR相比,该荧光实时定量PCR方法灵敏度更高;该方法可以扩增出猪嗜血杆菌目的基因,而扩增不出大肠杆菌0157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌基因,表明该检测方法特异性强;不同浓度的pGEM-T/HPS重组质粒分别进行了组间和组内验试验结果显示,重复性稳定性良好.
结论:该荧光实时定量PCR方法能够很好地用于副猪嗜血杆菌的临床检测.
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