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目的:本项研究拟通过采用寡核苷酸芯片技术,初步筛选与肺癌分子分型相关基因,并对肺癌的基因分型诊断及肺鳞癌、肺腺癌内亚型的存在进行有益的探讨,为分子分型研究、实现个体化治疗提供一定参考依据。
方法:(1)根据文献报道及既往实验结果,共筛选了与肺癌分型、分期相关的基因332个,用NCBI提供的BLAST系统分析确定其特异性序列,利用生物学软件设计成长度为60bp寡核苷酸探针,随后点制成芯片;(2)分别提取95D细胞、7例肺腺癌组织、8例肺鳞癌组织的总RNA,以总RNA逆转录为cDNA,制作成有荧光标记的探针;(3)上述制备的杂交荧光探针与芯片进行杂交,获得杂交结果;用ScanarrayLite激光共聚焦扫描仪扫描芯片。所得图象由Genepix 5.1分析软件,分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值,采用聚类方法分别对肺鳞癌和肺腺癌的基因表达谱进行相关性分析。
结果:(1)芯片杂交技术的可靠性:芯片上的332个oligo,分布在4个区域,每块区域设有阴性对照5个基因;(2)芯片可重复性:在基因连续横向点3个点的情况下,CV(变异系数)为10[%];不同批次95D细胞与芯片杂交之间的重复性为98.2[%];(3)7例肺腺癌组织的共有差异基因29个,与鳞癌组相区别的有7个如DCTN2、Stst2、BRCA2、TGFD等;8例肺鳞癌组织的共有差异基因46个,与腺癌组相区别的有24个,如KRT6A、HMGB2、lumican等; (4)7例腺癌组织中对332个基因表达的一致性在52-92[%]之间,8例腺癌组织中对332个基因表达的一致性在55-97[%]之间。
结论:(1)基因芯片技术能够快速高通量的筛选出与肺癌分子分型可能相关的基因; (2)初步筛选出肺腺癌特征性表达基因如DCTN2、Stst2、CENPM等,肺磷癌特征性表达基因如CCT6A、HMGB2、EEF1A1等,对肺癌组织进行分子分型,提供一定线索,为临床诊断提供更多信息; (3)在7例肺腺癌组织之间、8例肺鳞癌组织之间,也仍然存在表达差异较大的基因,可能预示肺腺癌、肺鳞癌内存在不同的亚型。