【摘 要】
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目的研究人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord Wharton’s Jelly-derived Mescnchymal Stem Cells,HuMSCs)向胰岛β细胞分化的潜能,为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病提供新
【机 构】
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汕头大学医学院第二附属医院儿科; 汕头大学医学院第一附属医院外科; 汕头大学医学院生殖医学研究中心;
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目的研究人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord Wharton’s Jelly-derived Mescnchymal Stem Cells,HuMSCs)向胰岛β细胞分化的潜能,为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病提供新的细胞来源。方法体外研究:分离培养HuMSCs,在胰岛细胞培养条件下定向诱导其分化.倒置相差显微镜下观察诱导后细胞形态:免疫组化、RT-PCR对诱导细胞进行胰岛β细胞标记鉴定:双硫腙染色鉴定锌离子表达;放射免疫法检测胰岛素含量。体内研究:经尾静脉将HuMSCs移植入糖尿病模型大鼠体内,动态观察大鼠血糖、体重及存活率变化;Hoechst33258标记细胞观察细胞在体内的定植情况;免疫组化及RT-PCR方法鉴定人胰岛素表达;HE染色观察胰岛的形态变化。结果体外研究:①药物诱导:经药物诱导后HuMSCs由长梭形逐渐变为多角形、类圆形部分聚集成团;免疫细胞化学染色显示,HuMSCs经药物诱导后表达人胰岛素和胰高血糖素抗原;RT-PCR检测药物诱导后HuMSCs表达了人胰岛素基因和PDX-1基因;双硫腙染色呈棕红色:放射免疫法结果显示,药物诱导后的HuMSCs胰岛素分泌量较对照组增加,差别有统计意义(P<0.05)。②共同培养:共培养条件下的HuMSCs由长梭形逐渐变圆,并聚集成团;经共培养后HuMSCs表达人PDX-1基因;放射免疫法结果表明,共培养组人脐带间充质干细胞随葡萄糖浓度的增高而分泌的胰岛素量也增加,与对照组相比差异显著(P<0.05)。体内研究:经尾静脉将HuMSCs移植入糖尿病大鼠体内后,能降低血糖,增加体重和延长存活时间;移植1个月后取大鼠组织行快速冰冻切片发现HuMSCs能在大鼠胰腺及肝脏中定植;移植后的大鼠胰腺表达人胰岛素;HE染色结果显示经HuMSCs移植治疗1月后糖尿病大鼠胰岛内细胞数目增加,排列较规则。结论HuMSCs在体外胰岛细胞培养条件或体内微环境的诱导下,具有向可分泌胰岛素的胰岛β样细胞分化的潜能,这种细胞可能为1型糖尿病提供一条新的治疗途径。
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