【摘 要】
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Apidaecin型抗菌肽指由昆虫细胞诱导表达的一类小的、富含脯氨酸(Pro)的、长度为18～20个氨基酸的抗菌肽.本研究通过对Apidaecin的分子改良,研究了N端氨基酸组成对其抗菌活性的影响,并在此基础上研究了改良肽的体外稳定性.用RVR替代蜜蜂肽Apidaecin 1 B(AP 1 B)中N-端的GNN序列,并在RVR之前增加不同数量的精氨酸或脯氨酸残基,得到6种不同的突变体.通过微量肉汤
【机 构】
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浙江大学动物科学学院,教育部动物分子营养重点实验室,浙江省动物饲料与营养重点实验室,杭州 310058
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会
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Apidaecin型抗菌肽指由昆虫细胞诱导表达的一类小的、富含脯氨酸(Pro)的、长度为18～20个氨基酸的抗菌肽.本研究通过对Apidaecin的分子改良,研究了N端氨基酸组成对其抗菌活性的影响,并在此基础上研究了改良肽的体外稳定性.用RVR替代蜜蜂肽Apidaecin 1 B(AP 1 B)中N-端的GNN序列,并在RVR之前增加不同数量的精氨酸或脯氨酸残基,得到6种不同的突变体.通过微量肉汤稀释法分别测定了(AP 1B)及其突变体对主要病原菌的最小抑菌浓度(MIC),然后以抗菌活性为指标,检测该抗菌肽在高温(60℃、80℃和100℃,水浴)、胃液(pH值2.0、pH值3.0和pH值4.0下,胃蛋白酶,37℃水浴)和肠液(胰蛋白酶,37℃水浴)条件下的稳定性.试验结果如下：(1)N端氨基酸序列的改变不会减弱AP 1B的抗菌活性.相反,突变体AP2对供试菌中G-的最小抑菌浓度显著降低,并且在AP2的N-端增加疏水性脯氨酸后,其抑菌性能也不受影响；(2) AP2对温度有一定的耐受性,经60℃处理5min后,抑菌活性基本不受影响,经80℃处理3min后,抑菌活性也无变化,当时间延长至5min时,抑菌活性略有降低,但仍有70.04％的抑菌率,而温度高达100℃时,处理3min抑菌率则降至27.81％.在不同pH值的胃蛋白酶环境中,37℃温浴不同时间,AP2的抑菌活性基本不受影响；而与胰蛋白酶作用时,37℃温浴1 min后,AP2抑菌率降低了29.58％,且随着处理时间的延长,抑菌活性显著降低,温浴240min后,其抑菌活性则降低为22.48％.结论如下：(1)N-端氨基酸序列不是影响AP 1B抗菌活性的重要位点,通过对N-端氨基酸序列的改变达到对AP 1B的分子改良；(2) AP2对高温以及低pH值和胃蛋白酶有较好的耐受性,而胰蛋白酶的降解对其抑菌活性影响较大.
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