羊膜联合水凝胶及hAMSCs对大鼠腓总神经损伤的修复作用

来源 :首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lfh8686806
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  目的:研究羊膜联合水凝胶及人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠腓总神经损伤的修复作用。方法:机械分离和二酶消化、差速贴壁法培养hAMSCs,观察细胞形态与生长,流式细胞术鉴定细胞表型。制作新鲜羊膜片,BeaverNano?水凝胶与hAMSCs组装,神经切除制备腓总神经损伤,观测大鼠行走、趾展情况和神经传到速度(NCV),计算趾展功能(TSF),FB逆向轴浆运输荧光染色,称量胫骨前肌湿重,计算肌肉恢复率,病理组织学检查肌肉组织变化,定量PCR测定脊髓组织基因转录水平。结果:(1)传代培养第3-5代hAMSCs形态、生长方式和免疫表型符合以往所述鉴定标准。(2)术后3和7d,除空白组外,其余大鼠右后肢均出现跛行或足不触地,足展距离较窄,TSF降低;第14d,羊膜片组与缝合组大鼠足印和趾展距离均大于模型组,TSF由高至低依次为:羊膜片组、空白组>缝合组>模型组、HG-AMP组、羊膜+hAMSCs+水凝胶(HG-hAMSCs-AMP组);28d,各组足印和趾展距离均有不同程度的进一步恢复;不同时间点TSF比较,羊膜片组于术后第7和14d TSF恢复速度最快,缝合组TSF则于14、28d逐渐恢复。(3)术后28d,与模型组比较,其他4组NCV增高,依次为空白组>羊膜片组、HG-AMP组、HG-hAMSCs-AMP组。(4)胫骨前肌肌肉恢复率由高至低依次为空白组>羊膜片组>缝合组> HG-AMP和HG-hAMSCs组。空白组肌肉组织结构完整、清晰,羊膜片组最接近空白组,且炎细胞浸润较少;缝合组可见轻微的肌肉萎缩性改变,模型组肌肉萎缩明显,炎细胞浸润较多;HG-AMP组肌肉萎缩较HG-hAMSCs-AMP组和缝合组明显。(5)除模型组外,其余各组均可见一定量FB蓝色荧光物质,空白组最多。(6)模型组脊髓中BDNF、CRMP-2、GAP-43、Lingo-1、NGF mRNA水平高于空白组,而GDNF mRNA水平降低;羊膜片组除Lingo-1和GDNF mRNA表达与模型组无显著差异外,其余4种基因mRNA表达水平均与空白组相当。结论:新鲜人羊膜可及早促进离断后缝合的腓总神经功能恢复,减轻所支配肌肉萎缩,提高TSF,疗效优于单纯缝合术。各组脊髓组织中BDNF、CRMP-2、GAP-43、Lingo-1、NGF和GDVF mRNA表达的变化进一步确证了人羊膜应用的效应。
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