【摘 要】
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目的:利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(Human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠杆菌密码子偏好性设计并合成WGF-1基因,克隆至PET48b载体构建重组原核表达质粒,经PCR及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌落进行IPTG诱导,经SDS-PAGE分析表达量及表达形式;表达产物经Ni
【机 构】
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长春生物制品研究所有限责任公司生物技术室,长春130062
【出 处】
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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会
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目的:利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(Human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠杆菌密码子偏好性设计并合成WGF-1基因,克隆至PET48b载体构建重组原核表达质粒,经PCR及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌落进行IPTG诱导,经SDS-PAGE分析表达量及表达形式;表达产物经Ni2+-亲和层析进行纯化,SDS-PAGE法检测纯度,非干扰型蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度;纯化产物经肠激酶酶切,并经Western blot鉴定。结果:重组表达质粒pET48b-Trx A-hIGF-1构建正确;融合蛋白主要以可溶形式表达,相对分子质量约为26000,相对表达量约为40％,经亲和层析纯度不低于90％,浓度为0.5 mg/ml;经肠激酶切割可见相对分子质量约为8000的hIGF-1目的条带,Western blot分析可见预期的特异性免疫印迹条带。结论:已成功构建并表达了hIGF-1融合蛋白,为其生物学活性研究及规模化生产奠定基础。
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