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目的:近年来,多项报道提示急性胰腺炎(AP)发病早期腺泡细胞内的空泡是自噬源性的,而胰酶的提前激活也被认为是缺陷性自噬的产物。硫化氢(H2S)是第三代内源性产生的气体信号分子。先前,我科研团队实验结果表明,抑制H2S的合成可通过增强细胞凋亡而减轻大鼠AP模型中的坏死性损伤。作为H2S相关的序贯性研究,本次研究的重点将是H2S在AP中对腺泡细胞缺陷性自噬的影响及其潜在机制。方法:体内实验部分:将120只雄性Wistar大鼠随机分为四组,每组30只。AP组,胆胰管逆行注射3.5%的牛磺胆酸钠溶液造模;sham组,仅行上腹部正中切开及肠管翻动;硫氢化钠(NaHS)组,AP造模1 h后经腹腔注射NaHS溶液;DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组,AP造模1 h后经腹腔注射PAG溶液。所有各组生存的大鼠于AP造模3 h、6 h和12 h后随机处死,留取胰腺组织及血浆,妥善处理、保存。体外实验部分:将AR42J细胞或mGFP-RFP-微管相关蛋白轻链3 (LC3)标记的AR42J细胞分为四组。AP组,以牛磺胆酸钠刺激AR42J细胞模拟AP;control组,对AR42J细胞给予等同于AP组牛磺胆酸钠使用剂量的磷酸盐缓冲液(PBS);NaHS组,于AP诱导前30 min给予NaHS;PAG组,于AP诱导前60 min给予PAG。所有各组细胞于AP模拟建立1 h、3 h和6 h后提取蛋白进行分析。结果:大鼠AP造模后6 h,胰腺组织病理学评分、炎症因子浓度、自噬性空泡堆积程度、LC3转化率及血浆淀粉酶、脂肪酶浓度均显著高于sham组;AP造模后以上指标的变化,可由NaHS的干预而进一步增强,也可由PAG的干预而明显减弱。AR42J细胞内自噬流分析结果提示AP时,自噬体-溶酶体融合无障碍。各组AR42J细胞蛋白中,AKT、AMPK、mTOR的磷酸化水平检测结果显示:AP时,AMPK磷酸化水平上调而mTOR磷酸化水平下调,其程度与局部H2S浓度呈正相关。最后,CC的引入不仅可抑制AMPK活性,而且连mTOR下游ULK1及P70S6K的活性也一并抑制。结论:H2S可通过AMPK/mTOR通路过度激活自噬从而加重AP相关性损伤。早期、主动的抑制内源性H2S产生及降低体内H2S浓度有望成为今后治疗AP的一个新途径。