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目的：建立双波长RP-HPLC同时测定牛黄上清片中栀子苷、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素含量的方法.方法：色谱柱:Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温为室温;流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液,采用梯度洗脱;流速1.0mL·min-1;检测波长分别为240 nm(栀子苷、芍药苷),275nm(黄芩苷、盐酸小檗碱、大黄素).结果：栀子苷、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的进样量分别在0.056～0.56μg(r=0.9998),0.1～1.5μg(r=0.999 6),0.104～1.56μg(r=0.9996),0.116～2.32μg(r=0.9996),0.04～0.4μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.9％,101.2％,100.1％, 96.5％,96.4％;RSD分别为2.79％,2.78％,2.27％,1.58％,2.22％.结论：方法简便、快速、灵敏,可用于同时测定牛黄上清片中栀子苷、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量.