【摘 要】
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目的 对曾做过骨髓移植、疑似MPSⅡ型的患儿及其父、母、姐进行IDS基因突变分析,对所发现的新剪切位点突变进行cDNA克隆测序等诸多鉴定,以揭示其突变性质和患儿发病内在原因,为今后的产前基因诊断创造必要的前提条件.方法 采用PCR-DNA直接测序法对患儿及其母亲的IDS基因进行全面的序列分析.在发现新突变后,提取患儿外周血总RNA并逆转录为cDNA,PCR扩增其突变所在的cDNA序列,并克隆至PM
【机 构】
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中山大学中山医学院医学遗传室,510080 广州
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目的 对曾做过骨髓移植、疑似MPSⅡ型的患儿及其父、母、姐进行IDS基因突变分析,对所发现的新剪切位点突变进行cDNA克隆测序等诸多鉴定,以揭示其突变性质和患儿发病内在原因,为今后的产前基因诊断创造必要的前提条件.方法 采用PCR-DNA直接测序法对患儿及其母亲的IDS基因进行全面的序列分析.在发现新突变后,提取患儿外周血总RNA并逆转录为cDNA,PCR扩增其突变所在的cDNA序列,并克隆至PMD 18-T载体.挑取经PCR验证的阳性克隆做测序鉴定.结果 先证者gDNA测序检出IDS基因存在c.1006+1 G＞A剪切位点突变,为杂合突变(分析为骨髓移植所致),其母、其姐也均为杂合突变,其父无此突变.经检索HGMD数据库及最新文献,证实该位点未见报道.先证者cDNA测序结果显示：患儿IDS基因表达的mRNA中第7外显子与第8外显子之间存在22bp的插入片段.但由于插入突变序列在测序图中显示峰图较低,故将PCR扩增的此段序列克隆至PMD18-T载体中测序,从而得到纯合的插入突变序列.结论 1、SNP数据库检索排除此变异为单核苷酸多态性变异.2、此位点的突变造成患儿第7内含子供体端的剪切位点识别错误,并导致第7内含子22bp的序列插入到其cDNA序列中,造成IDS基因移码突变及翻译的提前终止.3、所发现的IDS基因c.1006+1 G＞A剪切位点突变是一新的病理性突变,它是该MPSⅡ型患儿发病的根本原因.4、cDNA克隆测序对于做过骨髓移植的IDS基因的杂合突变的鉴定具有良好的效果.
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