【摘 要】
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本研究参考中国T1株序列设计两对引物，从新鲜的猪粪便中扩增戊型肝炎病毒(HEV)部分基因片段，长为1725bp，位于ORF2 205bp-1929bp，命名为HEV ORF2-A。其后根据HEV ORF2-A序列设计三对引物分别扩增HEV ORF2-A三段连续的基因片段，命名为HEV ORF2-B1、HEVORF2-B2、HEVORF2-B3，分别位于HEVORF2205bp-780bp(69 a
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院,南宁 530005 广西兽医研究所,南宁 530001 广西兽医研究所,
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会
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本研究参考中国T1株序列设计两对引物，从新鲜的猪粪便中扩增戊型肝炎病毒(HEV)部分基因片段，长为1725bp，位于ORF2 205bp-1929bp，命名为HEV ORF2-A。其后根据HEV ORF2-A序列设计三对引物分别扩增HEV ORF2-A三段连续的基因片段，命名为HEV ORF2-B1、HEVORF2-B2、HEVORF2-B3，分别位于HEVORF2205bp-780bp(69 aa-260 aa)，781-1353bp(261 aa-451 aa)，1354-1929bp(452 aa-643 aa)之间。将四段扩增的基因片段分别与表达载体PET32a连接，转让BL21感受态细胞，IPTG进行蛋白诱导。经1mmol/L的IPTG在37℃诱导6小时后，除PET32a-A在82.6kd处有微量融合蛋白表达外，PET32a-B1，PET32a-B2，PET32a-B3分别在41.3kd、41.5kd、41.8kd处有高水平的融合蛋白表达。用自然感染猪血清和万泰戊型肝炎病毒ELISA诊断试剂盒阳性对照血清进行western blot检测，三个短的融合蛋白均能检测到明显的条带，表明本研究所构建的三个表达载体具有良好的抗原性。
其他文献
目的：建立检测猪脑心肌炎病毒(EMCV)抗体的间接ELISA方法，为猪脑心肌炎的诊断与流行病学研究提供技术手段。方法：以EMCV重组非结构蛋白2C作为包被抗原，确定间接ELSIA反应的最佳工作条件；通过病毒阻断试验和交叉试验检验方法的特异性；通过与血清中和试验比较，确定方法的敏感性；通过对实验感染猪的血清2C抗体产生动态的检测，分析建立方法用于EMCV感染早期诊断的意义。结果：建立的间接ELISA
原核表达PRV gC功能区片段，纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC多克隆抗体；PCR克隆PRV gC全长基因，构建gC真核表达质粒，在真核细胞中表达gC基因；制备的抗体分析原核细胞和真核细胞表达的gC蛋白。Westen-blot分析表明抗PRV-gC抗体可以识别大肠杆菌表达的PRVgC蛋白、转染Vero细胞表达的gC蛋白和病毒感染细胞内的gC蛋白。结果说明本试验成功获得了特异性抗
从广西各地猪场采集了猪脑组织、流产的仔猪死胎、种公猪精液、蚊子样品共142份进行检测，结果有34份为JEV阳性。从检测得到的34份阳性样品中选择了1份死胎猪脑组织和1份种公猪精液分别接种BHK-21细胞、乳鼠及鸡胚进行JEV的分离。通过鉴定，证实所分离的两株为乙型脑炎病毒，分别命名为GP株和LC株。应用RT-PCR扩增出GP株和LC株的E基因，并进行了序列测定分析。结果表明，GP株和LC株之间的核
为调查广西猪戊型肝炎(HE)的感染情况，应用套式RT-PCR方法对采自广西9市25个猪场的422份3月龄左右猪只粪样及市售161份猪肝扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特异序列，并进行比对及遗传进化分析。结果:在422份猪粪样中，156份可以检测到HEV RNA，阳性率为37.0[％]；161份猪肝样本中，33份可检测到HEV RNA，阳性率为20.5[％]；25个猪场中检出HEV RNA的
构建双亚型(H3，H1)流感病毒血凝素真核表达质粒，并采用HeLa细胞进行表达。通过PCR分别改造已获得的H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段，在融合片段问引入(G4S)3柔性linker和口蹄疫2A蛋白linker。采用DNAstar结合生物信息学软件InsightII分析后对其空间构象进行模拟和评价。将融合表达H1HA1和H3HA的基因片段克降至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游。通过脂
运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e，将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中，转化E.coli DH10Bac感受态细胞，经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBactHT-VP2-5e，用脂质体法转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞，以间接免疫
目的:制备针对新城疫病毒F48E9株单克隆抗体，以用于NDV抗原变异研究及检测方法建立。方法:用新城疫病毒F48E9株全病毒及原核表达的重组F48E9-NP蛋白免疫BALB/c小鼠，全病毒间接ELISA筛选杂交瘤细胞株。用免疫印迹和间接免疫荧光试验鉴定单抗反应原性，间接ELISA试验鉴定单抗与其他NDV毒株的交叉反应，并采用NP蛋白分段融合表达技术对单抗识别区域初步定位。结果:共筛选到3株单抗杂交
目的:为了解广东省目前规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况，方法:我们采用ELISA的检测方法对采集于广东省14个市的28个规模化猪场的1 015份猪血清进行H1亚型和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果:结果表明，H1亚型抗体总阳性率为40.9[％]，猪场阳性率高达92.9[％](26/28)；H3亚型抗体总阻性率为16.8[％]，猪场阳性率为78.6[％](22/28)。其中粤西和珠三角
对2009年广东省各地采集到的犬脑及对应唾液腺进行检测，分离到2株狂犬病病毒。测定GD01和GD02株N基因核酸序列，并对其核苷酸差异做了比较分析。病毒对相邻广西等地区序列进行比较，相似性相似性在97.9～99.4[％]之间。与疫苗株相似性在87.8～88.1[％]之间。说明狂犬病病毒流行存在明显的地域现象及存在犬只健康带毒现象。
为了分析狂犬病病毒(RABV)感染细胞后的蛋白质组变化，本试验利用不同毒力的狂犬病病毒株(SRV9、CVS-11、BD06)分别感染N2a细胞，对感染48小时后的细胞进行2-DE电泳，并和未感染N2a细胞比较，通过对差异蛋白质点的质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析和部分差异蛋白的westernblotting验证，结果发现感染48h后，不同毒力狂犬病病毒感染的N2a细胞之间共出现41个蛋白