很多来源于天然产物、动植物细胞中以及重组蛋白的分离纯化要求纯度≥95％,并且要具有特殊的生物活性。重组人蛋白药物作为一种高技术产品不但要求以天然态存在,而且必须在制备和工业规模上进行生产.在这种情况下,即使一种目标蛋白的粗分离也需要采用二维色谱(2DLC)或多维色谱(mDLC).2DLC及mDLC也是蛋白质组学研究中获得生物信息的有力工具.2DLC通常需要两根色谱柱,可以离线或在线方式进行操作.离线操作简单,容易,但耗时长,难于自动化和重现,且样品容易损失和污染.而在线操作快速且容易重现,但需要专门的接口.如果2DLC可使用一根色谱柱并且能在线对天然态蛋白快速分离,且能大体积快速进样,便可从天然产物中大规模快速纯化蛋白,实现在蛋白质组学研究中低丰度蛋白的获取及功能性蛋白的富集与分离.在使用IEC和HIC进行2DLC分离蛋白时,因色谱条件非常接近人体的生理条件,如中性pH值,盐水溶液,室温等,所有这些条件都适合维持蛋白的生物活性。我们利用一种同时具有WCX和HIC两种保留模式的单柱二维色谱(2DLC-1C)在线分离天然蛋白,研究了分离度、选择性、天然蛋白在柱上的保留特点以及仪器的改进与蛋白的快速分离,包括缓冲液交换,将第一种模式下收集的组分进行在线收集并再定量进样至该色谱柱上进行第二种模式的分离,所有的操作均在一个密闭系统中进行.