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目的 中碳链脂肪酸(medium-chain fatty acid,MCFA)由于在肝脏内的快速功能特性引起了极大的注意,故大部分的研究重点都集中于MCFA 在肝细胞中的氧化,很少有关于MCFA 免疫方面的研究.肝脏作为MCFA 的 主要作用器官,本实验拟采用MCFA(C8-C12)来研究对人正常肝细胞株LO2 和肿瘤细胞HepG2 的免疫影响.方法 (1)将辛酸(C8)、癸酸(C10)、月桂酸(C12)配成五个不同梯度作用浓度(50、100、200、400、800μM),然后用90％DMEM 培养基+10％胎牛血清培养LO2 和HepG2 细胞,1-2 天传代一次,将生长状态良好的细胞,铺于96 孔板,用MTT 和LDH 检测不同浓度梯度的MCFA 作用于LO2 和HepG2细胞12、24、72 小时后的细胞活力,确定最适作用浓度和时间.在最适作用浓度下,进行台盼蓝染色、SOD 检测和倒置荧光拍照,进一步保证两种细胞生长情况和形态良好.(2)取健康小鼠的肝和脾,PBS 洗涤,研磨,离心弃上清,PBS 重悬得肝细胞和脾细胞,铺板,在最适的MCFA 和油酸的作用浓度和时间下,MTT 和LDH 检测健康的正常肝脾的细胞活力.(3)将LO2 和HepG2 细胞接种于六孔板,并用LPS 刺激使其作用浓度为5μg/mL,其余用最适脂肪酸浓度处理,在同样作用时间下,提取RNA.使用β-action 为内参,用q-PCR 法检测IL-1-α,IL-1-β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10 的mRNA 表达情况.筛选一部分的基因后,用ELISA 和Western Blotting 进一步定性定量检测MCFA 对LO2 和HepG2 细胞的免疫影响.结果 (1)MTT 和LDH：确定的最适作用浓度为200μM,作用时间24 小时.SOD 检测发现该浓度和时间对两株细胞无明显的脂质过氧化作用,台盼蓝和倒置荧光可观察到细胞形态良好.(2)肝脾细胞：辛酸(C8)、癸酸(C10)、月桂酸(C12)分别作用于健康小鼠的肝脾细胞,作用浓度和时间分别为200μM,24 小时,MTT 和LDH 检测结果 表现为MCFA 对肝脾细胞并无很大的损害作用.