【摘 要】
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目的：探索日柏醇体外杀伤软骨肉瘤细胞系SW1353的疗效及可能涉及的作用机制.
方法：不同浓度日柏醇处理软骨肉瘤细胞后,根据MTS实验绘制细胞杀伤曲线;以Hoechst染色观察细胞
【机 构】
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杭州市第一人民医院,南京医科大学附属杭州医院,骨科,浙江杭州,310000
【出 处】
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第二届“孤山论道”骨伤论坛、第二十三届浙江省中西医结合骨伤科专业委员会学术年会、第三届中国中西医结合学会骨伤科分会关节专
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目的：探索日柏醇体外杀伤软骨肉瘤细胞系SW1353的疗效及可能涉及的作用机制.
方法：不同浓度日柏醇处理软骨肉瘤细胞后,根据MTS实验绘制细胞杀伤曲线;以Hoechst染色观察细胞凋亡细胞核形态改变.流式细胞术行凋亡双染检测明确凋亡分布情况.通过装载ER Tracker探针荧光显微镜下观察内质网应激状态下细胞内质网肿胀情况.透射电镜观察细胞内质网肿胀的亚显微结构.蛋白质免疫印迹分析内质网应激及凋亡相关蛋白表达的改变.通过应用内质网选择性通路抑制剂Salubrinal反向验证PERK-eIF2α信号通路在治疗中所起作用.
结果：日柏醇体外诱导软骨肉瘤细胞凋亡,并且呈浓度梯度及时间梯度依赖.日柏醇诱导软骨肉瘤细胞发生内质网应激,出现内质网肿胀.蛋白质免疫印迹检测到内质网应激时PERK-eIF2α相关信号通路分子蛋白表达改变,活化Caspase cascade级联反应,活化凋亡效应蛋白cleaved PARP,诱导细胞发生凋亡.使用eIF2α选择性抑制剂能明显阻断日柏醇诱导软骨肉瘤细胞凋亡作用.
结论：日柏醇在体外诱导软骨肉瘤细胞发生内置网应激,激活未折叠蛋白反应,进而通过激活PERK-eIF2α信号通路,最终启动Caspase cascade级联反应,诱导软骨肉瘤细胞凋亡.
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