论文部分内容阅读
研究背景:机体内的巨噬细胞是具有不同表型的混合群体,其所处微环境发生改变会导致巨噬细胞极化。巨噬细胞通常极化成为两种亚型:促进炎症作用的M1型和抑制炎症作用的M2型。流感病毒感染后,肺内发生局部炎症反应,肺泡巨噬细胞的极化是对抗流感病毒感染的重要因素,目前尚缺乏对流感病毒诱导巨噬细胞极化模式及机制的深入探讨。研究目的:探讨流感病毒诱导巨噬细胞极化的模式以及潜在的机制,为开发新型抗流感药物提供理论基础。方法:我们用PR8(A/PuertoRico/8/34)(H1N1)流感病毒株感染小肺肺泡巨噬细胞,来研究流感病毒诱导的巨噬细胞极化模式以及其机制。收集病毒感染巨噬细胞的mRNA,通过定量PCR检测巨噬细胞极化标志物的变化;收集病毒感染巨噬细胞的总蛋白,通过Western blotting检测极化相关标志物,并检测巨噬细胞极化相关信号通路的激活情况;应用TLR2-/-和TLR5-/-小鼠检测两种Toll样受体在流感病毒感染巨噬细胞极化中的功能。结果:结果表明,PR8感染3小时和6小时诱导巨噬细胞向M1型极化;随着时间的推移,在PR8感染病12小时24小时,巨噬细胞的极化亚型变为M2b型;Western blotting实验结果表明,巨噬细胞的极化模式与基因表型相似;极化相关通路检测发现,与阴性对照组相比,PR8诱导巨噬细胞极化过程中,Pi3k/Akt磷酸化水平显著上升;在PR8诱导巨噬细胞极化过程中加入Pi3k/Akt通路阻断剂LY294002可以抑制巨噬细胞的极化;检测流感病毒感染TLR2-/-和TLR5-/-小鼠肺泡巨噬细胞的极化模式发现,这两种Toil样受体与流感病毒诱导的巨噬细胞的极化无明显相关性。结论:流感病毒可以诱导巨噬细胞极化,其模式为早期极化为具有较强杀伤活性的M1型巨噬细胞,后期极化为兼具杀伤活性和组织损伤修复活性的M2b型巨噬细胞;流感病毒诱导巨噬细胞极化过程需要Pi3k/Akt信号通路的激活;TLR2和TLR5受体在流感病毒诱导巨噬细胞极化过程中不发挥关键作用。