【摘 要】
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鸡传染性支气管炎病毒HN99株膜蛋白(M)基因的阳性重组质粒pMD18-T-M经BamH Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切，克隆入杆状病毒真核表达载体pFastBacHTa-MBP。将所构建的重组表达质粒pFastBacHTa-MBP-M转化到ACBacmid-egfp菌中，采用脂质体转染法用重组的ACBacmid-egfp-MBP-M转染Sf9细胞，经两代盲传后，在倒置显微镜下可见转染Sf9细胞核膨大，细
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南 郑州 450002
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会第七届暨2008年学术研讨会理事会第二次会议
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鸡传染性支气管炎病毒HN99株膜蛋白(M)基因的阳性重组质粒pMD18-T-M经BamH Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切，克隆入杆状病毒真核表达载体pFastBacHTa-MBP。将所构建的重组表达质粒pFastBacHTa-MBP-M转化到ACBacmid-egfp菌中，采用脂质体转染法用重组的ACBacmid-egfp-MBP-M转染Sf9细胞，经两代盲传后，在倒置显微镜下可见转染Sf9细胞核膨大，细胞折光性增加，细胞增大最后破碎，与正常Sf9细胞差别明显;在荧光显微镜下可以看到细胞浆内有绿色的荧光，用出现病变的Sf9细胞提取DNA，分别用M13引物、特异性引物进行PCR鉴定，成功地从病变细胞中扩增出特异性序列，表明已经产生重组病毒。表达产物的SDS-PAGE和Western Blot分析表明，重组病毒蛋白条带大小约为68Ku，与预期的结果一致。
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MC5R基因是黑素皮质素受体家族的一员，与动物肥胖相关。本研究利用PCR-RFLP技术对该基因在猪7个不同群体的多态性进行了检测，发现在大白、梅山、大梅和梅大群体只有AA型，长大只有AB型，在长白猪群体则3种基因型均有分布。
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本文应用RT-PCR方法从三元猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18(pIL-18)基因，经克降测序表明与已发表序列同源性很高，均为96％以上。将目的基因插入表达载体pcDNA3.1,成功构建了pIL-18基因的重组真核表达载体pcDNA/pIL-18，为研究pIL-18抗病毒作用和免疫佐剂作用奠定了基础。
本研究将鸡Igλ轻链信号肽与pEGFP·C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体pEGFP-C1-SP，通过对鸡Igλ轻链基因的定向克隆，构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后，荧光显微镜观察及Western blotting检测均证明融合蛋白在COS7细胞的分泌表达。
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