【摘 要】
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文献报道冬虫夏草(Cs)的成熟伴有化学成分的改变和中华被毛孢(Hs)的竞争性菌落形成能力的显著下降：Cs中存在蝙蝠蛾拟青霉(Ph)和冬虫夏草菌(Os)的三个突变基因型.本研究采用MassARRAY SNP MALDI-TOF质谱基因分型法、Southern印迹杂交法和PCR限制性酶切法,检测Cs中Os突变基因型以及这些突变基因型和Ph在冬虫夏草成熟过程中表达的变化.SNP质谱基因分型法在8个SNP
【机 构】
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Nu Skin Center for Anti-Aging Research, Provo, UT 84601, USA;石河子大学药学院 新疆石河子市832000;美国华茂公司北京临床药理研究中心
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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文献报道冬虫夏草(Cs)的成熟伴有化学成分的改变和中华被毛孢(Hs)的竞争性菌落形成能力的显著下降：Cs中存在蝙蝠蛾拟青霉(Ph)和冬虫夏草菌(Os)的三个突变基因型.本研究采用MassARRAY SNP MALDI-TOF质谱基因分型法、Southern印迹杂交法和PCR限制性酶切法,检测Cs中Os突变基因型以及这些突变基因型和Ph在冬虫夏草成熟过程中表达的变化.SNP质谱基因分型法在8个SNP位点上证实转换突变的2个AT偏倚基因型与GC偏倚型同时存在于子座中,同时发现至少2个未知序列颠换突变基因型.这5个(至少)突变基因型菌的表达在Cs成熟过程中出现复杂的动态变化.根据已知ITS序列EcoRI位点的点突变,应用EoRI消化冬虫夏草子座和僵虫体基因组DNA,Southern杂交检验应用Ph或Hs特异性探针,发现Cs的成熟伴有EcoRI敏感(GC偏倚型)和EcoRI抵抗(AT偏倚型)2组Os基因型和Ph的rDNA生物量的显著增加,以及它们在子座和僵虫体中差异表达.在未成熟Cs,AT偏倚型Os的生物量在僵虫体中极少,但在子座中占绝对优势；而GC偏倚型的表达则相反,其生物量在子座中极少,而在僵虫体中占绝对优势.随着Cs的成熟,对EcoRI敏感和抵抗的2组基因型菌的生物量在僵虫体中几乎相等；虽然GC偏倚基因型菌在子座中的表达逐渐增加,但其生物量远低于EcoRI抵抗突变基因型菌.ITS PCR+测序检验发现子座中有至少2组GC偏倚型基因型ITS片段序列,2组序列重叠,但其中之一出现5和3末端截短.随着Cs的成熟,截短和未截短2组GC偏倚基因型在子座中出现非同步的表达变化,可能提示两者属于不同的GC偏倚型菌或亚种.在子座和僵虫体中,Ph与AT偏倚基因型菌形成同步表达变化模式.结论：Cs中存在至少6种Os突变基因型,尚需进一步研究,确定它们是种内还是种间变异.Cs的成熟伴有Ph和Os的rDNA总生物量的显著增加,以及Ph和这些突变基因型Os菌差异表达的动态变化.这些菌差异表达的动态变化可能对Cs子座的萌生和成熟至关重要,对进一步研究Cs的无性世代与有形世代的连接以及与Cs成熟相关的疗效效价的变化提供了重要证据.
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