超声微泡破坏联合穿膜肽协同促基因转染的体内外实验

来源 :中国超声医学工程学会第十二届全国超声心动图学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kalok
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目的:探讨微泡联合穿膜肽促基因转染效率和安全性,并探讨HGF基因治疗急性心肌梗塞的可行性,期望为缺血性心脏病提供一种新的基因治疗策略. 方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和40只心肌梗死模型SD大鼠作为实验对象,随机分为5组,即①空白对照组(C),②超声+空白微泡组(US+MB),③超声+载穿膜肽微泡组(US+MBTAT),④超声+载基因微泡组(US+ MBHGF),⑤超声+载基因及穿膜肽微泡组(US+MBHGF+TAT).荧光显微镜及流式细胞仪检测HGF基因在细胞内的表达及转染效率.MTT法检测该方法对HUVEC生长活性的影响.激光共聚焦显微镜观察HGF基因在大鼠心肌内的表达情况.偏振光显微镜观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原在大鼠梗死心肌周边区的分布情况.免疫组织化学法(IHC)检测梗死心肌周边区CD34的表达,并在显微镜下计数心肌内新生微血管密度(MVD).RT-PCR及Western Blot检测HGF的mRNA及蛋白的表达. 结果:体外实验,US+MBHGF+TAT组的绿色荧光强度及转染率均高于其它各组,并对细胞活性无明显影响.体内实验,US+MBHGF+TAT组的绿色荧光强度高于其它各组,Ⅰ型、Ⅲ型胶原明显少于其它各组,HGF mRNA及HGF蛋白的表达均高于各组,IHC结果显示新生的微血管被染成棕黄色,US+MBHGF+TAT组的MVD最高,与其它各组比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论:超声微泡联合穿膜肽可能为缺血性心脏病的基因治疗提供一种安全、有效的的基因转移途径.
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