实时定量PCR检测樱桃黄化致死植原体含量

来源 :中国植物病理学会2011年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:turandeji
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由植原体引起的樱桃致死黄化病害首先在四川西昌发现,根据16S rRNA基因序列将其划分为组榆树黄化组(16S rV)。通过实验检测樱桃致死黄化植原体(CLY)在樱桃各组织内的分布规律,实验结果推测从健康樱桃中扩增到的DNA片段为樱桃叶绿体的部分序列。在进行非特异性RT-qPCR时,感病和健康樱桃中都有荧光变化曲线,但其溶解曲线峰值不同,因此可以通过溶解曲线的峰值加以区分RT-qPCR中的特异性和非特异性扩增。将扩增的樱桃叶绿体部分序列与CLY植原体16S rDNA(684~1000)片段进行比对,相似性为71.38%。进一步比对CLY的全长16SrDNA序列与野生草莓叶绿体序列相似性为69.22%。从比对序列中选取差异较大的序列作为特异探针R16Sprb_CLY行特异性RT-qPCR检测,除了能够检测樱桃致死黄化植原体外还能检测到同组枣疯植原体,其他泡桐丛枝、苦楝丛枝和板栗黄化皱缩植原体中都检测不到。而用引物R16nF/R16nR进行非特异RT-qPCR,该引物能够检测出16Sr1组的泡桐丛枝、苦楝丛枝及16SrXIX组的板栗黄化皱缩植原体,因此,用引物R16nF/R16nR进行非特异性RT-qPCR可以定量检测不同组的植原体。用特异性RT-qPCR检测嫁接传病樱桃不同部位植原体含量,结果表明嫁接樱桃苗部位最近的新发腋芽浓度最高,其次为病组培苗,再次为田间样品,嫁接部位同侧细根也检测到植原体,但浓度很低,而其他部位皆未检测到植原体存在。
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