【摘 要】
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目的：探讨利用含HSPA 1A启动子荧光素酶报告基因质粒的稳定转染HepG2/HSPA 1A细胞来系统评价不同环境污染物早期毒性的可行性.方法 构建含HSPA 1A启动子的pGL4.17/HSPA 1A重组质粒并转染入人HepG2细胞,建立稳定细胞株HepG 2/HSPA1A.用热应激(42C热休克1h,37C恢复培养不同时段)和一定浓度的苯并[a]芘、甲醛和亚硫酸氢钠作用HepG 2/HSPA1
【机 构】
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苏州大学公共卫生学院,江苏苏州,215123 苏州市疾病预防控制中心,江苏苏州,215004
【出 处】
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中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会学术会议暨环境内分泌干扰物的毒理学研究新技术新方法研讨会
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目的：探讨利用含HSPA 1A启动子荧光素酶报告基因质粒的稳定转染HepG2/HSPA 1A细胞来系统评价不同环境污染物早期毒性的可行性.方法 构建含HSPA 1A启动子的pGL4.17/HSPA 1A重组质粒并转染入人HepG2细胞,建立稳定细胞株HepG 2/HSPA1A.用热应激(42C热休克1h,37C恢复培养不同时段)和一定浓度的苯并[a]芘、甲醛和亚硫酸氢钠作用HepG 2/HSPA1A细胞不同时段(0,1,4,8,12,24 h)后,分别测定细胞的相对荧光素酶活性、存活率、丙二醛(MDA)含量、Olive尾距和微核率.结果 热休克恢复培养不同时段后,细胞的相对荧光素酶活性显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01),且在恢复培养8h后,细胞的相对荧光素酶活性最高,为对照组的28倍.40 μM苯并[a]芘和150 μM亚硫酸氢钠作用后,细胞的相对荧光素酶活性随着染毒时间的增加而逐渐增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).40 μM甲醛作用后,与对照组相比,细胞的相对荧光素酶活性也显著增加,且在染毒8h后,细胞的相对荧光素酶活性最高,为对照组的3.3倍.仅苯并[a]芘染毒后细胞的相对荧光素酶活性与MDA浓度呈正相关,差异有统计学意义(r=0.493,P＜0.05).苯并[a]芘、甲醛和亚硫酸氢钠染毒后,HepG 2/HSPA1A细胞的相对荧光素酶活性均与Olive尾距、微核率呈正相关,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HepG2/HSPA1A细胞系统的相对荧光素酶活性可以敏感地反映苯并[a]芘、甲醛和亚硫酸氢钠的早期毒性效应,该细胞系统可用于快速评估环境污染物的综合毒性效应.
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