【摘 要】
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简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheckCo.)，对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定，结果24份HCLV半成品细胞苗95.83％与兔体定型热反应结果相符，检测敏感性可达20头份/瓶(或109个病毒拷贝教/瓶)。但该方法无法区分猪瘟病毒抗原
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心·南京天邦生物科技有限公司 江苏南京 210014 扬州大学兽医学院 江苏扬州 225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会
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简单、快速地测定猪瘟病毒的含量是猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)生产工艺中难以解决的技术之一。本试验通过应用猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒(IDEXX HerdCheckCo.)，对已知滴度的24份HCLV半成品细胞苗和21份成品疫苗进行抗原含量测定，结果24份HCLV半成品细胞苗95.83％与兔体定型热反应结果相符，检测敏感性可达20头份/瓶(或109个病毒拷贝教/瓶)。但该方法无法区分猪瘟病毒抗原与牛流行性腹泻病毒抗原。试验结果证明，IDEXX猪瘟抗原/血清ELISA试剂盒能够稳定、快速、简单地用于HCLV细胞苗的半成品与成品的病毒含量测定，为疫苗生产的质量控制提供了一种可靠和稳定的方法。
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提取Asia 1型FMDV总RNA，经RT-PCR扩增出病毒的衣壳蛋白前体P1-2A基因片段和蛋白酶3C基因片段，构建了真核表达质粒pVAX1P1-2A-3C。将pVAX1P1-2A-3C接种小鼠，同时设pVAX1和PBS对照组，14天加强免疫一次，然后用间接ELISA法、MTT染色试验和IFN-γELISPOT试验分别检测了小鼠的特异性抗体水平，T淋巴细胞增殖能力和产生IFN-γ脾淋巴细胞数，以
以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作，将3非翻译区中的一级结构进行了系列替换突变，构建全长PRRSV突变体克隆，解析3UTR突变对病毒复制的影响，目的是解析PRRsV病毒基因组复制与亚基因组转录的启动子序列，通过转染MARC-145细胞，针对核衣壳蛋白(N)和非结构2(nsp2)间接免疫荧光实验发现：3末端第一位的碱基可以被替换成C，第二，三位碱基是不能被替换的，而第四位
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行，对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置，结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通
目的: 利用pEGFP-N1载体构建了含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5。方法:采用RT-PCR方法扩增了JL/07/SW毒株GP5基因和猪IL-18基因。将该基因与真核表达载体pEGFP—N1连接，克隆获得重组质粒pEGFP-IL18-GP5。将获得重组质粒转染MACR-145细胞，检测目的蛋白的表达情况。结果:RT-
根据GenBank中登录的PCV-2序列，设计一对特异性引物，扩增PCV-2去核定位信号(nuclear logalizationsignal，NLS)的Cap蛋白基因，经BarnHI和XhoI双酶切后将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中，并转化到表达菌株Rossetta(DM3)中，采用IPTG进行诱导表达，使用GST-ProteinPurtification Kit亲和层析纯化方法对表达的G
将35只10日龄健康仔猪平均分成7组进行猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合重组质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)和rCap蛋白免疫试验。共进行4次免疫肌肉注射，每次间隔2周;于第4次免疫后4周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Tb)/细胞毒性T细胞(Tc)的
为了研究检测猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法，本试验采用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)，分别设计了六条针对CSFV 5’端保守基因特异引物，经条件优化后，建立猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法。结果表明，在63℃恒温条件下45分钟，就能很好的扩增出CSFV目的片段：RT-LAMP产物经XHhoI酶酶切确定产物即为目的片段：将CSFV和其它六株与CSFV同属的病毒进行RT-LAMP扩增
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