【摘 要】
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以绛红色小单孢菌G1008基因组为模板,庆大霉素生物合成基因簇上的genB4-genK为靶标,扩增靶标上、下游序列作为同源交换臂,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建重组质粒pBK003,通
【机 构】
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福州大学生物科学与工程学院,福州350108
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以绛红色小单孢菌G1008基因组为模板,庆大霉素生物合成基因簇上的genB4-genK为靶标,扩增靶标上、下游序列作为同源交换臂,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建重组质粒pBK003,通过去甲基化修饰后,经接合转移导入绛红色小单孢菌G1008,利用安普霉素抗性筛选,得到阳性转化子BK1.通过PCR和测序鉴定,证明pMK003已插入绛红色小单孢菌G1008基因组的目标位点。经松弛培养后,筛选得到双交换菌株,命名为绛红色小单孢菌GBK1(△genB4-K),成功敲除了绛红色小单孢菌G1008庆大霉素生物合成基因簇上的genB4PB3K模块,为该模块功能研究奠定了基础。
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