基于T4DNA连接酶的microRNA电化学检测方法研究

来源 :第十二届全国电分析化学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq271232312
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研究结果表明,恶性肿瘤等重大疾病的发生和发展与人体内miRNA的异常表达密切相关,使之成为疾病诊断新的潜在生物学标记.但miRNA序列短、同源miRNA之间序列相似度高(1-2个碱基差别),使设计miRNA互补探针非常困难,杂交强度低,错配可能性高。因此,建立高选择性的miRNA检测方法至关重要。T4 DNA连接酶来自感染T4噬菌体的大肠杆菌,可以修补双链结构中的单链缺口,而且仅对完全互补配对的双链起作用,具有非常高的选择性。本文基于磁性微球分离技术,量子点信号放大技术及T4 DNA连接酶的高选择性,发展了一种快捷、灵敏、高选择性的miRNA电化学检测方法。将两条探针链分别修饰在CdS量子点以及磁性微珠上,并与待测miRNA杂交。若待测miRNA与探针完全匹配,在T4 DNA连接酶的作用下会使两条探针链连接,解链分离后,收集磁性微珠并进行电化学检测,即可确定待测miRNA的浓度。研究结果表明.在50 fM~30 pM浓度范围内,miR-27a的浓度与CdS量子点在Bi膜玻碳电极上的电化学响应呈现出良好线性关系,线性相关系数为0.9949,检测限为12 fM(S/N=3)。
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