【摘 要】
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MiR408是植物中一类高度保守的miRNA,其靶基因编码含铜蛋白,miR408的表达受发育和环境条件的显著影响.拟南芥中miR408是介导对光和铜协调响应的HY5-SPL7基因网络中的一个重要成分,进一步表明miR408在植物对环境的响应中所发挥的核心作用.本研究基于丹参基因组Survey数据库,从中搜索并克隆得到366bp的含有稳定茎环结构的miR408前体序列及其上游723bp片段的启动子区
【机 构】
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西北濒危药材资源开发国家工程实验室,陕西师范大学,西安710062
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MiR408是植物中一类高度保守的miRNA,其靶基因编码含铜蛋白,miR408的表达受发育和环境条件的显著影响.拟南芥中miR408是介导对光和铜协调响应的HY5-SPL7基因网络中的一个重要成分,进一步表明miR408在植物对环境的响应中所发挥的核心作用.本研究基于丹参基因组Survey数据库,从中搜索并克隆得到366bp的含有稳定茎环结构的miR408前体序列及其上游723bp片段的启动子区,Genebank登录号分别为KU360384和KU360385,并将miR408的前体序列命名为Sm-MIR408.生物信息学分析结果显示：Sm-MIR408上游启动子序列与模式植物拟南芥Ath-MIR 408、水稻Osa-MIR 408启动子区具有许多相同的顺式作用元件,如G-box、CGTCA-motif、TGACG-motif、GTAC-motif等,而HSE、ERE、CATT-motif作用元件仅存在于丹参启动子区；miR408成熟序列在不同物种中具有很高的保守性；基于不同物种miR408前体序列构建系统进化树,来源于单子叶植物的miR408前体序列聚为一支,来源于双子叶植物的miR408前体序列聚为另一支.实时定量PCR分析结果显示：Sm-MIR408在丹参的根、茎、叶、花中都有表达,其中在花中的表达量最高,根中最低；Sm-MIR408的表达受茉莉酸甲酯和伤害的抑制,黑暗和持续光照也可抑制该基因的表达.Sm-MIR408基因的克隆与表达分析为今后研究丹参中miR408的功能奠定了基础.
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