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背景:自然杀伤(Natural killer, NK)细胞在机体抗肿瘤、抗病毒和免疫调节反应中发挥重要作用,目前在肿瘤免疫治疗中已被寄予厚望。E4BP4(也称为Nfil3)是特异性调控NK细胞发育的转录因子,在IL15信号通路中发挥重要作用。但目前E4BP4上游调控机制尚不清晰。目的 :研究NK细胞关键转录因子Nfil3上游转录调控机制方法与结果 :首先对小鼠Nfil3基因的启动子区进行生物信息学分析,发现富含转录因子PBX1和ETS1潜在结合位点。其次通过构建NK细胞条件型Pbx1敲除鼠,我们发现Pbx1缺陷鼠的NK细胞比例及数目显著下降,这与Nfil3缺陷鼠表型一致,说明PBX1可能促进Nfil3的表达。为了进一步验证PBX1与ETS1分别能结合Nfil3启动子区目标序列,我们首先分别在细胞系中过表达或干扰PBX1、ETS1的表达,使用萤光素酶报告基因检测技术验证了PBX1和ETS1分别能结合Nfil3启动子区序列,启动下游基因转录。此外,我们用生物素标记Nfil3启动子区目标序列DNA,与过表达PBX1或ETS1的293T细胞核蛋白共孵育后,使用连接磁珠的链霉素pulldown DNA结合蛋白,验证了Nfil3启动子区目标序列DNA能结合PBX1、ETS1蛋白。因小鼠原代NK细胞经细胞因子IL-15刺激后上调表达Nfil3,于是我们分离小鼠骨髓、脾脏NK细胞,经IL-15刺激后进行ChIP实验,进一步证明NK细胞中转录因子PBX1、ETS1结合Nfil3启动子区目标序列DNA,促进Nfil3转录表达。为了明确PBX1与ETS1的相互作用机制,我们使用荧光共定位和co-IP技术分别证明了转录因子PBX1和ETS1存在共定位并能相互结合,协同促进Nfil3的转录。而Pbx1条件型敲除鼠NK细胞接受IL-15信号能力下降,流式检测发现缺陷PBX1的NK细胞E4BP4及下游转录因子Eomes表达水平显著下降。结论 :IL15活化转录因子PBX1与ETS1,两者协同促进NK细胞关键转录因子Nfil3及下游Eomes表达。该研究不仅丰富了NK细胞发育关键转录因子Nfil3上游转录调控机制,而且为指导NK细胞体外扩增用于肿瘤免疫治疗奠定基础。