【摘 要】
：
目的 对FGF21[K59R]突变体基因工程菌发酵和纯化工艺进行优化,为筛选抗肝癌的药物提供实验数据.方法 采用正交试验确定FGF21[K59R]突变体基因工程菌的最佳LB培养基配方,利用SDS-PAGE电泳检测不同发酵条件对FGF21[K59R]突变体蛋白表达情况；收集高表达菌体,超声破碎后,利用离子交换层析(Q柱)确定洗脱时最佳的NaCL洗脱浓度.采用Ni-NTA亲和层析纯化,确定最佳的咪唑洗
【出 处】
：
2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会
论文部分内容阅读
目的 对FGF21[K59R]突变体基因工程菌发酵和纯化工艺进行优化,为筛选抗肝癌的药物提供实验数据.方法 采用正交试验确定FGF21[K59R]突变体基因工程菌的最佳LB培养基配方,利用SDS-PAGE电泳检测不同发酵条件对FGF21[K59R]突变体蛋白表达情况；收集高表达菌体,超声破碎后,利用离子交换层析(Q柱)确定洗脱时最佳的NaCL洗脱浓度.采用Ni-NTA亲和层析纯化,确定最佳的咪唑洗脱浓度.利用SUMO酶酶切目的蛋白,除去FGF21突变体蛋白中的SUMO标签.最后进行Ni-NTA层析柱纯化,得到FGF21[K59R]突变体蛋白.结果 LB培养基最佳配比(g/L)：蛋白胨11,酵母粉6,氯化钠10,葡萄糖1；在此基础上优化基因工程菌的发酵条件,确定LB培养基pH6.5 ～ 7.2,装液量20％,菌体密度(A600)1.0,IPTG浓度0.6mmol·L-1,33℃条件下诱导5h,突变体蛋白的表达量由优化前的12％提高至35％；离子交换层析时,最佳的氯化钠洗脱浓度200mM,Ni柱亲和层析时,最佳的咪唑洗脱浓度为80mM,酶切后,二次Ni柱亲和层析时最佳咪唑浓度为15mM.结论 培养基配方、pH值、装液量(溶解氧)、菌体密度(A600)、IPTG浓度、温度、诱导时间均对FGF21[K59R]突变体基因工程菌表达量有影响；经离子交换和亲和层析后可以获得纯度大于90％的FGF21[K59R]突变体蛋白.
其他文献
As a highly malignant tumor, salivary gland adenoid cystic carcinoma (ACC)accounts for nearly 10% of all the epithelial salivary tumors and with a low 5-year survival rate less than 20% in highly meta
Background: To study the inhibition of retinoblastoma cell viability by two commonly usedautophagy inhibitors, chloroquine (CQ) and 3-methyladenine (3-MA),alone or in combination with the conventional
Pyruvate dehydrogenase (PDH) is the multi-enzyme complex of mitochondrion.Its catalysis is of great importance in the process of energy metabolism.PDH catalyzes the decarboxylation of pyruvic acid to
肿瘤细胞基因突变，特别是糖酵解中的丙酮酸激酶肌肉同工酶剪切变构体2(PKM2)突变，可导致葡萄糖有氧糖代谢途径的明显改变，即Warburg效应：葡萄糖代谢增加200倍，但产物乳酸被排出体外，不能进入线粒体三羧酸循环，则谷氨酰胺成为肿瘤细胞线粒体产生能量所依赖的原料，而谷氨酰胺酶是谷氨酰胺进入线粒体三羧酸循环必不可少的酶.谷氨酰胺缺乏或谷氨酰胺酶的抑制均能抑制肿瘤细胞的生长.，但肿瘤细胞的差异性使其
The point mutations in the active-site arginine residues of isocitrate dehydrogenase (IDH) (IDH 1/R 132, IDH2/R 140, and IDH2/R 172) occur frequently in a variety of cancers, including acute myeloid l
目的 研究边缘下皮层(infralimbic cortex,IL)在海洛因觅药行为消退和恢复中的作用及可能的作用途径.方法 成年SD雄性大鼠采用固定比率程序(fixed ratio,FR)1进行海洛因自身给药训练,连续14 d,建立海洛因自身给药模型.环境消退12 d,第1-5 d消退训练15 min,实验处理组动物在消退训练后立即向双侧IL区注射GABA受体激动剂Baclofen+Muscimo
Chronic stress results in hippocampal injury, and impairs learning and memory ability of animals.However the cellular mechanisms underlying cell death within hippocampus remain elusive.The present emp
目的：通过分析儿童嗜酸性粒细胞增多症(hypereosinophilia HE)的临床特点及病因构成，为临床诊治提供依据.方法：回顾性分析2009年4月-2015年5月共6年在浙江大学医学院附属儿童医院住院的88例嗜酸性粒细胞增多症患儿的临床资料.结果：感染性疾病28例(31.8％)，其中呼吸道感染11例，寄生虫感染9例，败血症4例，泌尿系感染2例，蜂窝织炎1例，胆囊炎并胰腺炎1例；变态反应性疾病
耳聋是影响人类健康和生活的常见疾病之一,也是临床上最常见的遗传病.据统计,每1000个新生儿中就有一位患有先天性耳聋,其中60％以上是由遗传因素引起的；在包括成年人的所有耳聋病人中,遗传性耳聋约占50％.本研究旨在开发一种检测欧美人群常见的遗传性耳聋基因突变位点的方法,推动欧美地区临床上耳聋基因诊断与筛查.本方法采用博奥生物自主研制的专利技术,从血液或血斑样本中提取人基因组DNA,通过多重等位基因
目的：建立蒿本内酯的HPLC测定方法,以其包封率与载药量为指标,优化蒿本内酯包合物的制备工艺.方法：建立反相HPLC法测定蒿本内酯的含量,以饱和水溶液法制备包合物,采用二次正交实验L9(34)考察主客分子比、时间、温度对包合物包封率和载药量的影响.结果：在0.991～31.712μg·ml-1的浓度范围内,蒿本内酯的线性关系良好,日内日间精密度符合要求；二次正交试验得到的最优处方为质量体积比8∶1