【摘 要】
：
将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rHA,再感染细胞,超声收获HA蛋白。通过血凝和血凝抑制、免疫印迹法、ELISA分析表明该蛋白得到表达
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部动物流感重点开放实验室,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
论文部分内容阅读
将H1亚型猪流感病毒的血凝素(HA)基因克隆到pFastBacGP67A载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组质粒后,转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭载体,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,经过三轮蚀斑纯化,获得重组杆状病毒rHA,再感染细胞,超声收获HA蛋白。通过血凝和血凝抑制、免疫印迹法、ELISA分析表明该蛋白得到表达,且具有与天然蛋白相似的生物活性,为研制猪流感病毒基因工程亚单位疫苗奠定基础,也可通过所表达的蛋白来研制猪流感ELISA检测试剂盒来做猪流感血清流行病学调查,为防控流感大流行提供参考。
其他文献
为提高IL-18成熟蛋白基因在真核系统中高效表达,对其进行定点突变,使酵母低频密码子突变为偏嗜性密码子,构建了IL-18成熟蛋白变构基因真核重组表达载体pPICZαA-MI118,并将其转化入P.pastoris X-33.重组菌株X-33/pPICZαA-MI118经1％甲醇诱导后,表达产物的上清液经SDS-PAGE检测,结果在上清液中发现目的条带,对其进行Western blot检测,约在19
将鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-DuIFN-α)以1,3,6μg三个剂量基因枪表皮注射免疫28日龄北京鸭,15天后接种DHV弱毒疫苗,同时设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA-DuIFN-α免疫鸭对照组,10只鸭/组,于DVH弱毒疫苗免疫后5、7、14、21、28、42、56、70d采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)和鸡胚中和实
2006年四川成都、西昌等地爆发流行具有鸭病毒性肝炎(DVH)典型临床症状和病变的传染病,从间接免疫荧光检测呈阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30-40nm,对氯仿、pH3.0、50℃ 60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24-60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被1型鸭肝炎病毒(DHV)高免血清中和.分离
临床对绿脓杆菌病的诊断常采用传统的病原分离鉴定和血清学方法,但病原分离和生化鉴定不仅费时费力,而且敏感性和特异性都较差.血清学诊断方法不能在病的早期得出结果,也可能因实验室的不同而产生检验差异。为了解决这些难题,现采用绿脓杆菌的单项PCR实验方法,可分别检测每株病原.使用其中具有特异性的1对引物,建立了绿脓杆菌algX基因的PCR检测方法,能够在二个反应管中PCR各扩增出1425bp1条特异性片段
通过致病力试验、免疫原性检测对肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株IBVXJ-2进行了生物学特性的研究。致病力检测结果证实IBVXJ-2株可以致SPF鸡胚卷缩、僵化,EID50达10-8.3/0.1m；鸡胚肾细胞在接毒后96h出现皱缩、脱落等明显的细胞病变；对20日龄非免疫鸡攻毒后第2天,试验鸡出现甩鼻、伸颈张口呼吸症状。将IBVXJ-2株抗原经乳化后接种1月龄非免疫鸡,在免疫后22天和44天用ELIS
应用PCR(或RT-PCR)分别扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒-2型、日本乙型脑炎病毒和猪瘟病毒的一段保守序列,克隆到pMD 18-T Simple Vector构建重组质拉,用于制备各病毒的捕获DNA.将各捕获DNA按一定的阵列点。硝酸纤维素膜上后加以固定,制成诊断基因芯片.在多重PCR扩增过程中掺入生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进
通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们构建了一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株.首先构建重组转移质粒pEHA1.将pEHA1转化供体大肠杆菌β2155,并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养5小时,然后涂到含霉素抗性的培养基上培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株.通过PCR、遗传稳定
将APP apxⅣ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apxⅣ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,结果获得了3株能稳定分泌抗apxⅣ蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为4H3,1D11和4C1.亚型
提取猪小肠total RNA,根据已发表PMAP37的基因序列进行RT-PCR扩增,并将RT-PCR产物克隆至pMD19-Tsimple载体测序。结果表明所得序列516bp,开放阅读框504bp,编码167个氨基酸,分子量18.9kd,与目的序列同源性高达99.6％。本研究为进一步研制用于家禽细菌性疾病治疗的高效、广谱、无药残的新型抗菌药物提供基础条件。
猪链球菌2型(Streptocooccus suis tupe 2,SS2)可引起猪脑膜炎、心内膜炎、关节炎、肺炎和败血症等,也可感染人并致死,是一种重要的人畜共患病病原.猪链球菌2型的毒力因子及其致病机制十分复杂,而各毒力因子的作用机理及毒力因子之间的相互作用关系还不清楚.迄今为止已知的毒力因子主要有英膜多糖、溶菌酶释放蛋白、胞外因子、溶血素和粘附素等,本文拟对猪链球菌2型的毒力因子作一综述。