【摘 要】
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以牛分枝杆菌PPDB为刺激抗原的IFN-γ试验(PPDB-IFN-γ)是OIE推荐的牛结核病实验室辅助诊断方法,ESAT-6(PE)和CFP-IO(Pc)蛋白是结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原,其基
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 7300700
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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以牛分枝杆菌PPDB为刺激抗原的IFN-γ试验(PPDB-IFN-γ)是OIE推荐的牛结核病实验室辅助诊断方法,ESAT-6(PE)和CFP-IO(Pc)蛋白是结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原,其基因在非结核分枝杆菌和卡介苗的基因组中均不存在.为了提高PPDB-IFN-y的敏感性和特异性,在此基础上建立新的PPDB-PE/C-IFN-,诊断方法.对PE和PC分别进行原核表达并纯化.用PPDB.PE、PC和PE/C(PE、PC等量混合)作为四种刺激抗原(PPDB为参照),体外平行刺激56份阳性和460份阴性牛全血,孵育、收获血浆,间接ELISA检测产生的IF-γ水平.经统计学分析,绘制ROC曲线,分别确定PPDB-IFN-γ.PE-IFN-γ、Pc-IFN-γ和PEc-IFN-γ的阳性判定最佳临界点及其敏感性和特异性;并据此进一步分析PPDB分别与PE、Pc或PE/C联用(PPDB-PE-IFN-γ、PPDB-PC-IFN-γ.PPDB-PE/C-IFN-γ,串联和并联)的敏感性和特异性.结果显示,PE、PC的分子量分别为27.8 ku和16.4 ku;PPDB-IFN-y的最佳临界点为0.02,其敏感性和特异性为94.6％和92.2％,PE、PC.PE/C的最佳临界点相同,均为0.01,其中PE/C-IFN-γ的敏感性和特异性最高,为92.9％和95.7％;联用时,PPDB-PE/C-IFN-y的敏感性和特异性最高,其串联时为89.3％和96.5％,并联时为98.2％和91.3％0证实PE/C-IFN-γ,的敏感性比PPDB-IFN-γ低1.7％,但特异性高3.5％;PPDB-PE/C-IFN-γ并联时,敏感性比PPDB-IFN-γ高3.6％,串联时特异性比PPDB-IFN-丫高4.3％.
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