目前临床上检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的ELISA方法多以病毒粒子或体外重组表达的结构蛋白作为包被抗原,基于非结构蛋白的ELISA抗体检测方法尚未见报道.本研究首先以一株IBV分离株提取的核酸为模板,扩增了编码IBV非结构蛋白5(nsp5)的基因片段,利用原核表达系统体外表达IBV nsp5蛋白,进而以重组表达的GST-nsp5融合蛋白为抗原,建立检测IBV抗体的间接ELISA方法.通过对ELISA反应条件的优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度为3.64μg/ml,待检血清稀释倍数为1:200,酶标抗体稀释倍数为1:1000;O.OIM PH7.4的PBS缓冲液为包被液;10％新生牛血清为封闭液;含0.05％吐温-20的5％脱脂奶为样品稀释液;待检血清和酶标二抗反应时间分别为60min和45min,底物反应时间lOmin.在优化反应条件的基础上,用建立的ELISA检测660份临床样本并与IFA检测结果比较分析,确定以S/P值等于0.12作为IBV抗体阴、阳性血清判定的临界值.特异试验表明:建立的方法不与新城疫病毒、流感病毒和传染性法氏囊病毒等阳性血清发生交叉反应.同批抗原制备的不同检测板变异系数(CV)值在3％-16％之间,不同批抗原制备的检测板CV值在7％一19％之间.本方法与间接免疫荧光试验相比,阳性符合率为93.11％,阴性符合率为95.38％,总符合率为93.33％.与美国IDEXX公司的IBV抗体ELISA试剂盒比较,本方法的阳性符合率为98.11％,阴性符合率为95.00％,总符合率为97.62％;应用建立的nsp5抗体检测方法分别检测IBV强毒感染以及弱毒疫苗、灭活疫苗免疫后鸡血清抗体消长规律,结果发现nsp5-ELISA和商品化的IDEXX IBV ELISA试剂盒检测结果呈现相同的趋势,具有较高的符合率.上述结果表明,所建立的IBV抗体ELISA检测方法高度特异和敏感,具有开发成为一种快速、可靠、有效的IBV抗体临床检测方法的潜力.