【摘 要】
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目的 探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用.方法 通过倒置显微镜观察ASB诱发HK-2细胞的形态改变,应用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术法检测其对HK-2细胞生长、细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)产生的影响,并用Western印迹法检测其对凋亡相关蛋白细胞色素C(CytC)、胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax的影响,探讨ASB
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心,北京100850 军事医学科学院毒物药物
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目的 探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用.方法 通过倒置显微镜观察ASB诱发HK-2细胞的形态改变,应用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术法检测其对HK-2细胞生长、细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)产生的影响,并用Western印迹法检测其对凋亡相关蛋白细胞色素C(CytC)、胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax的影响,探讨ASB对HK-2细胞体外毒性作用的特征和机制.结果 ASB呈剂量依赖性抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC50值分别为(19.12±3.55)和(11.56±3.88)g·L-1.乳酸脱氢酶(LDH)漏出率显著增加,MMP下降,阻滞HK-2细胞周期于G2/M期,细胞内的ROS和上清液中的丙二醛(MDA)水平明显增加,谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和总ATP酶活性降低；同时ASB使HK-2细胞内CytC、胱天蛋白酶3、Bcl-2和Bax蛋白水平均升高,并且呈现明显的剂量和时间效应关系.结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH,SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致CytC等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死.
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