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目的对雌激素-KLK6基因-乳腺癌细胞的生物学性状三者之间的关系进行了研究,观察雌激素对KLK6表达水平的调节,以及对MCF-7细胞株生物学特性的影响,证实KLK6基因的作用及雌激素促乳腺癌细胞恶性变是否通过KLK6参与。方法①建立KLK6 mRNA实时荧光定量检测方法。②定量检测KLK6 mRNA在33例不同病程乳腺癌患者的癌组织及25例正常组织中的表达水平以及统计分析与肿瘤有无转移、雌激素受体、孕激素受体、癌基因CerbB-2等临床病理特征的关系,探讨其临床意义。③对雌激素受体阳性ER(+)人乳腺癌细胞株MCF-7进行雌激素调节试验,以探讨雌激素和抗雌激素药物三苯氧胺对MCF-7 KLK6基因表达水平及对细胞生物学特性的影响。④应用RNAi技术,以乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,探讨KLK6基因被干扰沉默后MCF-7细胞形态、增殖生长周期及细胞凋亡的变化。⑤应用MCF-7乳腺癌细胞株建立裸鼠乳腺癌动物模型,体外合成KLK6 siRNA并构建其表达载体,瘤体注射siRNA或载体,探讨siRNA对乳腺癌荷瘤鼠实体瘤细胞KLK6基因的干扰效果及其对瘤体细胞生物学特性的影响。结果①以KLK6 cDNA质粒为标准品建立标准曲线,以GAPDH做内对照和SYBR Green I作为荧光染料,建立了KLK6 mRNA实时荧光定量检测方法。KLK6和GAPDH的扩增效率分别为0.99和0.98。批内变异系数分别为2.0%和0.8%,批间变异系数分别为3.2%和3.9%。扩增产物序列分析和熔解曲线分析表明该方法简便、特异、可靠,适宜KLK6基因表达的研究。②KLK6 mRNA在癌组织中的表达水平(0.4327±0.2348)比正常组织(0.2194±0.1154)明显升高,两者差异非常显著(P<0.001=;在有淋巴结转移病人癌组织中的表达水平(0.3096±0.1192)比未转移的(0.5527±0.2615)明显降低,两者差异非常显著(P<0.01):在雌激素受体阳性组(0.2811±0.1164)明显低于雌激素受体阴性组(0.5097±0.2521),两者有显著性差异(P=0.005.P<0.01): 在PR(+)癌组织中表达低(0.3673±0.2185),PR(-)组表达高(0.4939±0.3425),但两者的差异不明显(P>0.05);与乳腺癌相关基因CerbB-2的表达无相关性(P>0.05)。③雌激素(17-βE2)浓度在10-11mol/L以上时,MCF-7细胞KLK6mRNA及hK6表达降低,细胞G0/G1期百分率下降,S期和G2/M百分率长高;经三苯氧胺作用后,KLK6mRNA和Hk6表达升高,细胞G0/G1期百分率略有增高,S期细胞和G2/M期细胞百分率降低。④体外MCF-7细胞KLK6基因表达沉默后,S期细胞增加,细胞凋亡无明显变化。⑤体内siRNA表达载体抑止了人乳腺癌荷瘤鼠KLK6的表达后,移植瘤生长速度加快,肿瘤细胞S期明显增加,细胞凋亡有下降趋势。结论KLK6基因在早期乳腺癌病人高表达,晚期低表达并伴随肿瘤转移;雌激素下调MCF-7细胞株KLK6基因的表达,促进细胞增殖,三苯氧胺上调KLK6基因表达,抑止肿瘤细胞增殖。体外MCF-7细胞株和体内移植瘤KLK6基因表达沉默后肿瘤细胞生长加快。提示,KLK6基因表达是受雌激素下调并参与促乳腺癌细胞增殖的抑止因子,为乳腺癌的防治提供了新思路。