【摘 要】
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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以急性肠炎、腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性肠道传染病.各年龄段猪均对PEDV易感,其中哺乳仔猪的发病率和死亡率可达100％.2010年以来,PED在我国暴发并广泛流行,给养猪生产造成了巨大经济损失.笔者从发病猪场
【机 构】
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中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室,北京,100193
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以急性肠炎、腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性肠道传染病.各年龄段猪均对PEDV易感,其中哺乳仔猪的发病率和死亡率可达100％.2010年以来,PED在我国暴发并广泛流行,给养猪生产造成了巨大经济损失.笔者从发病猪场分离鉴定出1株PEDV,命名为BJ-2011-C.全基因组序列测定和分析表明,该毒株S蛋白存在特征性的变异,即在55-56位、135-136位氨基酸之间分别有4个氨基酸(GENQ)和1个氨基酸(N)的插入,以及155-156位氨基酸(DG)的缺失.经动物感染试验表明,BJ-2011-C属强毒株.同时,从疫苗免疫猪场分离到1株弱毒株,命名为CHM2013,与泰国毒株AVCT12和韩国毒株SM98基因组高度同源(99％),且在S基因和ORF3基因均存在碱基缺失.利用BAC载体作为骨架载体，插入CMV启动子、丁型肝炎病毒核酶序列(HDV)及牛生长激素(BGH)等元件，构建出PEDV BJ-2011-C和CHM2013的全长克隆质粒pBACBJ-2011-C和pBAC-CHM2013，并在BJ-2011-C的15932位和CHM2013的1809位引入遗传标记用于区分拯救病毒与亲本病毒。分别将重组质粒pBACBJ-2011-C、pBAC-CHM2013直接转染VERO-CCB81细胞并进行传代，可观察到与亲本病毒相同的细胞病变。提取第二代拯救病毒基因组并进行RT-PCR检测及测序，可检测到遗传标记。利用PEDV N蛋白单克隆抗体4E3进行间接免疫荧光实验可观察到感染阳性细胞。由此表明，构建的全长重组质粒pBACBJ-2011-C、pBAC-CHM2013具有感染性，可拯救出病毒。多步增殖曲线结果表明，拯救病毒rBJ-2011-C和rCHM2013与其亲本病毒具有相同的增值动态。动物实验表明，rBJ-2011-C可致2日龄哺乳仔猪严重的腹泻，致死率为100%，而rCHM2013感染仔猪无临床表现。综上结果表明，成功建立了PEDV强、弱毒株的反向遗传操作平台，为深入研究PEDV的致病性机制以及新型疫苗的研究奠定了基础。
其他文献
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建立了牛奶中黄曲霉毒素M1(AFM1)残留的固相萃取-超高效液相色谱(UPLC)和超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法.样品经乙腈提取,Plexa固相萃取柱净化,UPLC荧光检测器或UPLC-MS/MS电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式检测.A1FM1在0.5～50μg/L的系列浓度范围呈线性相关,牛奶中AFM1的检测限为0.1μg/kg,定量限为0.2μg/kg.在0.1～
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本文简要分析了基层在兽药使用方面出现的一些新情况、新问题和新趋势。主要表现有：一些养殖单位一旦发现畜禽生病，心态极其急躁，希望马上能治好，就不计经济成本、不讲社会责任、无视道德底线，乱投医、乱用药、乱治疗，致使在兽药使用上缺乏科学性，存在极大地盲目性、随意性；少数兽药经营企业受经济利益驱动，心存侥幸，不仅不为畜禽养殖单位着想，还违背兽药管理相关法律法规，随意向其推销、出售无兽医处方笺的处方兽药等；
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