【摘 要】
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将禽传染性支气管炎病毒(IBV)结构基因上的多个线性B 细胞抗原表位进行不同的串联表达，用IBV 标准血清对不同组合的串联蛋白进行抗原性鉴定和分析，为下一步建立血清抗体检测方法奠定基础.前期工作中从IBV 结构基因S、M、N 上预测和筛选到8 个线性B 细胞表位，通过RT-PCR 和合成方式获得，然后通过酶切、连接、添加柔性linker 的方式串联成4 种线性B 细胞表位串联基因，与PGEX-4T
【机 构】
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四川大学生命科学学院,动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室,生物资源与生态环境教育部重点实验室,“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川成都望江路29号 610064
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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将禽传染性支气管炎病毒(IBV)结构基因上的多个线性B 细胞抗原表位进行不同的串联表达，用IBV 标准血清对不同组合的串联蛋白进行抗原性鉴定和分析，为下一步建立血清抗体检测方法奠定基础.前期工作中从IBV 结构基因S、M、N 上预测和筛选到8 个线性B 细胞表位，通过RT-PCR 和合成方式获得，然后通过酶切、连接、添加柔性linker 的方式串联成4 种线性B 细胞表位串联基因，与PGEX-4T-1连接构建了4 种串联表达载体，转化E.coli B L21(DE3)进行原核表达.
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对云南省两个发病鸡场的组织病料进行病原分离，通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR 检测，证明分离毒株为新城疫病毒.采用特异性引物经RT-PCR 扩增F基因，纯化后克隆至pMD18-T 载体，并对其进行测序.序列比对及系统发育分析结果表明：分离获得的云南省2株新城疫毒株F基因核苷酸与Lasota 株之间的同源性为99.4％-99.6％，与F48E9 株之间的同源性为89.0％-89.1％.
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将本实验室保存的一株La Sota 病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代五次后筛选到一株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为La Sota C5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异；参照La Sota C5 株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR 的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT 转录载体中,成功构建含有病
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