【摘 要】
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目的 利用基因工程技术构建免疫毒素DT388sBAFF融合蛋白表达载体,获得高效稳定的基因工程菌株,建立重组蛋白的分离纯化技术,并进行其靶向生物学活性的初步研究.方法 根据本室优化合成的DT388sBAFF基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入到pMD19-T克隆载体,菌落PCR、限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定阳性克隆.重组克隆载体经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳分离目的
【机 构】
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山东省医学科学院基础所,山东济南250062 山东大学附属省立医院中心实验室,山东济南 25002
【出 处】
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泛环渤海地区(七省二市)生物化学与分子生物学会2010年学术交流会
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目的 利用基因工程技术构建免疫毒素DT388sBAFF融合蛋白表达载体,获得高效稳定的基因工程菌株,建立重组蛋白的分离纯化技术,并进行其靶向生物学活性的初步研究.方法 根据本室优化合成的DT388sBAFF基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入到pMD19-T克隆载体,菌落PCR、限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定阳性克隆.重组克隆载体经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,并插入表达载体PcoldⅡ的相应酶切位点,转化E.coliBL21感受态菌株,菌落PCR鉴定重组表达载体.挑取单个克隆菌落扩增培养至对数生长期,转化菌株经ITPG诱导,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定重组蛋白.Ni2+-NTA层析柱纯化目的蛋白,透析袋透析去除洗脱液中的咪唑等小分子物质,SDS-PAGE检测纯化后蛋白.免疫荧光实验检测与细胞表面受体特异性结合能力.
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