蛋白质药物的团聚是生物制药生产、运输和储存过程中极具挑战性的一大难题[1]。蛋白质团聚体的数量、性质和尺寸分布等对蛋白质药物的安全性和药物效价具有显著影响。蛋白质团聚中通常以纳米和亚微米尺寸的颗粒占据绝大多数,如何对如此微小粒径的颗粒进行快速的定量检测是亟需解决的科学难题。目前动态光散射（DLS）、纳米颗粒追踪分析技术（NTA）和透射电子显微镜（TEM）等方法存在分辨率低、通量低或费用昂贵等缺陷。我们实验室结合瑞利散射和鞘流单分子荧光检测技术研制的超高灵敏流式检测装置（HighSensitivity Flow Cytometry, HSFCM）能够检测到粒径仅为24 nm的单个二氧化硅颗粒和27 nm的单个病毒,粒径分辨率媲美电镜,检测速率高达每分钟10000个颗粒,具有高度的统计代表性[2][3]。利用HSFCM侧向散射信号的检测优势,我们以浓度为20 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液为模型,在65oC条件下加热5小时制备蛋白质团聚颗粒,梯度稀释1000倍后进行HSFCM检测,发展了一种蛋白质药物中非可逆团聚颗粒的单颗粒水平快速、定量检测新方法,定量对比了不同赋形剂对蛋白质药物储存过程中团聚现象的影响,如:盐类、糖类、多元醇、氨基酸和环糊精类等。此外,我们对市面上的3种注射型蛋白质药物中的纳米颗粒进行了测定,发现蛋白质药物中纳米尺寸颗粒的浓度达到10¹⁰～10¹¹个/mL,且尺寸分布差异很大。相较于其它的蛋白质团聚检测方法,单颗粒水平的HSFCM检测方法具有快速、定量、实用性强等优点,有望为蛋白质药物的质量控制和赋形剂的选择提供实验指导。