Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定

来源 :中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenglin229
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目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exsomes。 方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exsomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。 结果:电镜下可以观察到提取的exsomes平均大小为50~100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45 000、43 000和70 000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示exsomes膜表面和内部有明显的金颗粒。 结论:Ana-1巨噬细胞分泌exsomes。
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