【摘 要】
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[目的]链霉素(Streptomycin,STR)是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染.因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量(MRLs),其中在牛奶为200 μg/L,肌肉、脂肪和肝脏为600 μg/kg,肾脏为1000 μg/kg.为了建立相关的快速荧光免疫检测方法,本研究合成了2种不同结构的链霉素荧光标
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100 中国农业大学动物医学院,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]链霉素(Streptomycin,STR)是一种氨基糖苷类抗生素,其在兽医临床可用于治疗革兰氏阴性敏感菌引起的各种感染.因其潜在的毒性和在食品动物体内残留,我国农业部已规定了链霉素在动物性食品中的最高残留限量(MRLs),其中在牛奶为200 μg/L,肌肉、脂肪和肝脏为600 μg/kg,肾脏为1000 μg/kg.为了建立相关的快速荧光免疫检测方法,本研究合成了2种不同结构的链霉素荧光标记物,并通过质谱和免疫学技术进行了鉴定.[方法]将2mg链霉素溶于0.5 mL 50％乙醇水,再加入50uL三乙胺,4mg FITC荧光素(或5 mg DTAF),振荡至固体成分完全溶解.室温避光反应至少24h.取50 uL反应液用薄层色谱方法纯化,刮下最底层(Rf=0.01)的黄色条带,用1 mL 50％甲醇氨水提取并过滤后,氮吹除去滤液中的氨水,得到亮黄色的溶液即为合成的荧光标记物STR-FITC和STR-DTAF.[结果]将合成的荧光标记物分别稀释至浓度为0.1 mg/mL,经质谱检测显示STR-FITC和STR-DTAF对应的分子离子峰质荷比(m/z)分别为974 [M+2H]+和1083 [M+C2H5O]+,与其理论上计算的分子量相一致,表明本研究成功合成了这两种荧光标记物.将所得的两种荧光标记物稀释至浓度为10 nM,分别与过量的链霉素特异性抗体混合,比较加入抗体前后荧光偏振(FP)值的变化.结果显示,STR-FITC与抗体混合后,FP值明显升高(可达210 mP)；而使用STR-DTAF时,FP值上升幅度较小(仅为130 mP).而抗体分别与荧光素FITC和DTAF作用时,FP值变化不大.[结论]链霉素特异性抗体可同时与这两种荧光标记物结合,且对STR-FITC的亲和力更高,从而为进一步建立检测链霉素的荧光免疫分析方法奠定了基础.
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