本研究以为我国海水养殖中最重要的4种病原菌——哈维氏弧菌、鳗弧菌、灿烂弧菌和迟缓爱德华氏菌的特有基因或gyrB基因为基础,建立这几种病原菌的多重PCR检测技术和荧光定量PCR检测技术,以期为疾病的快速诊断及防治提供技术支撑。具体结果如下:以哈维氏弧菌的vhhP2基因序列、鳗弧菌的empA基因、灿烂弧菌和迟缓爱德华氏菌的gyrB基因序列设计在物种间有良好特异性而在物种内有良好通用性的特异性引物,建立了能在一次PCR反应中同时检测出这4种病原菌的多重PCR方法,该方法对这4种病原菌的检测灵敏度分别为哈维氏弧菌3.9×104CFU/反应,基因组DNA354.9 pg;鳗弧菌6.8×104CFU/反应,基因组DNA201.5 pg;灿烂弧菌5.8×104CFU/反应,基因组DNA204.7 pg;迟缓爱德华氏菌3.2×105CFU/反应,基因组DNA967 pg。以迟缓爱德华氏菌gyrB基因设计实时定量PCR引物,同时以所设计的灿烂弧菌的gyrB基因和哈维氏弧菌vhhP2基因特异引物为基础,建立了SYBR Green I实时定量PCR检测这3种病原菌的方法,结果显示所建立的实时定量PCR检测方法对灿烂弧菌、迟缓爱德华氏菌和哈维氏弧菌的最低检测限量分别达到20copies、60 copies和7 copies,且所建立的方法具有特异、敏感、快速、定量的优点。应用建立的方法对人工感染的大菱鲆病样进行了检测,三个被检样品均呈阳性反应,且与传统分子鉴定方法鉴定结果一致,进一步验证了所建立的快速检测方法的适用性。本研究建立了我国海水养殖重要病原菌的快速检测技术,多重PCR可在一次PCR反应中完成多病菌的定性检测,而荧光定量PCR可对相应致病菌进行定量检测,定性与定量相结合,又相互验证,对这几种病原菌的检测能达到准确快速定量的目的,这将为海水养殖疾病防控和健康养殖提供技术支撑。