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淀粉分支酶基因SBEIIa和SBEIIb是参与玉米籽粒支链淀粉合成的关键基因。本研究根据直链淀粉合成的机理,利用RNA干扰技术通过转基因抑制玉米SBEIIa和SBEIIb基因的表达,以期降低支链淀粉合成,促进直链淀粉的合成,获得高直链淀粉玉米新种质。以SBEIIa和SBEIIb基因保守区和特异区内不同长度和序列的片段连入载体pFGC5941,构建10个SBEIIRNAi植物表达载体,分别由胚乳特异性启动子P27Kd和组成型启动子P35S启动,并将两个载体中的内含子更换为过氧化氢酶功能型内含子。利用玉米茎尖遗传转化技术将上述10个淀粉分支酶SBEIIRNAi载体转入玉米骨干自交系昌7-2,经过PCR检测和Southern杂交验证,获得7种SBEIIRNAi结构的转基因阳性植株。通过比较转不同SBEIIRNAi结构玉米籽粒的SBEIIa和SBEIIb基因表达强度、淀粉分支酶活性以及直链淀粉含量,可以得出:RNAi结构中正、反义臂的长度为893bp和为467bp的在抑制靶基因的表达效果方面无显著差异;RNAi结构的臂区域由SBEIIa特异序列和SBEIIb特异序列相连构成优于仅由SBEIIb保守序列组成;P27Kd驱动的RNAi结构对SBEIIa和SBEIIb基因表达的抑制优于P35S;内含子更换的干扰载体效率较高。最终确定由胚乳特异性启动子P27Kd启动,靶序列为SBEIIa基因特异区长片段和SBEIIb基因特异区融合片段的RNAi结构干扰效果最优。转该结构的T3代玉米在授粉后20天籽粒SBEIIa和SBEIIb基因表达强度仅为对照的35%,淀粉分支酶活性为对照的37%,成熟籽粒直链淀粉含量达到55%,但总淀粉由野生型的66%降低到63%以下,并且穗重和百粒重有所下降。下一步工作将把ac株系与本实验室已有的转基因高淀粉玉米杂交,以探索创制高淀粉-高直链淀粉玉米新种质。