氨肽酶N(APN)是一种公认的肿瘤标记物,研究开发该酶的荧光成像方法对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。目前报道的APN 荧光成像探针均以天然配体NGR(Asn-Gly-Arg)为骨架,是一类基于配体-受体亲和力的小分子探针。虽然该类探针能够在细胞甚至动物水平标记APN,但因其具有较强的背景信号而使用受限。相比较而言,可激活的荧光探针在与靶蛋白作用之前没有荧光,被靶蛋白降解之后释放出荧光团而发光,大大降低了背景信号。具有参比波长性质的荧光探针,不仅能够降低背景信号,而且可以减少测试环境的影响,使得测试结构更加准确。本文设计、合成了三个具有参比波长性质的荧光探针,它们能够很好地被APN 识别和降解。如下图所示,探针6e 在被APN 降解之前呈蓝色荧光(图B),降解之后呈绿色荧光(图C),通过imageJ 软件处理可读出绿光与蓝光的强度比(图D),从而可以准确、在线地反应活细胞中APN 的分布情况和水解活性。