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【背景及目的】哺乳动物的生物钟是由许多不同的组分组成的,以维持身体不同组织的生理周期。其主钟位于下丘脑视交叉上核(SCN),是昼夜节律的一个主要起博器,发生周期约24小时节律,同时向各个组织器官发出同期的节律信号,构成各个组织器官的细胞也产生同位相的24小时节律,它控制机体的行为和生理节律,包括睡眠、运动、体温和许多内分泌等过程。SCN自身节律性具有内在的遗传基础,同时又受到环境、光信号以及一些化学物质的诱导和影响。目前的实验已经表明节律性调节通过三个核心E-box,D-BOX,RREs结合位点调节基因表达得以实现。核心的调节为BMAL1-CLOCK与E-box结合作用激活另外一些生物钟基因表达。既往的实验已经证实Rev-Erbβ基因在生物节律性表达中起重要作用,包括睡眠障碍、脂代谢及糖代谢。但是目前的研究对于Rev-Erbβ基因在分子水平产生及保持其生物钟节律性的调节机制还不十分明确。【方法】运用细胞转染;荧光素酶转录活性测定Rev-Erbβ基因的转录活性,凝胶阻滞分析检测REV-ERBβ蛋白和BMAL1核酸相互作用。实时的生物体发光监测系统动态观察Rev-Erbβ基因启动子区域的E1,E2,E3,D box结合位点对于Rev-Erbβ基因的生物钟节律调节作用。【结果】荧光素酶转录活性测定实验显示Rev-Erbβ基因包括5’端和外显子1的启动子区域具有明显转录活性;实时的生物体发光监测系统显示Rev-Erbβ启动子区域的E1,E2,E3,D boxes结合位点,具有保持其生物钟节律振幅的重要作用。凝胶阻滞分析实验直接证实REV-ERBβ与BMAL1启动子区域ROREs活性区域结合发挥抑制Bmall活性作用,从而参与生物钟节律的核心的调节BMAL1-CLOCK过程,对机体的行为和生理节律产生重要作用。【结论】我们的实验结果提供了以下重要证据:Rev-Erbβ基因包括5’端和外显子1的启动子区域的3个E-box结合位点及1个D-box结合位点具有明显转录活性,从而影响Rev-Erbβ基因生物钟节律的位相及振幅;而Rev-Erbβ基因转录起始点上游的启动子区域对于Rev-Erbβ基因生物钟节律调节没有明显作用。我们还发现四个结合位点中,E1-box结合位点对于Rev-Erbβ基因生物钟节律的位相影响最大。REV-ERBβ与BMAL1启动子区域ROREs活性区域结合发挥抑制Bmall活性作用。该实验为完善REV-ERBβ的生物钟调节机制及临床应用提供理论基础。