【摘 要】
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目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外模拟的肿瘤微环境中是否受到其中过度表达的致瘤性酪氨酸激酶信号分子的影响而发生恶性转化,为安全有效地利用MSCs提供一定的前期理论基础和实验依据.方法 本实验分筛选实验和验证实验两部分,筛选实验部分设为实验组,对照组和空白对照组三组.实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长；对照组为
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院、重庆医科大学儿科研究所、儿童发育疾病研究教育部重点实验室
【出 处】
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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
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目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外模拟的肿瘤微环境中是否受到其中过度表达的致瘤性酪氨酸激酶信号分子的影响而发生恶性转化,为安全有效地利用MSCs提供一定的前期理论基础和实验依据.方法 本实验分筛选实验和验证实验两部分,筛选实验部分设为实验组,对照组和空白对照组三组.实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长；对照组为星型胶质细胞与MSCs间接共培养模拟正常微环境下MSCs的生长；空白对照组为MSCs单独培养.验证实验分二组：阴性对照组(正常微环境中IL-6处理的MSCs作为正常对照组组),实验组(肿瘤微环境中过量表达的IL-6处理的MSCs为实验组).经显微镜连续观察各实验组细胞形态的变化.检测RT-QPCR及Western-blot方法检测各组P53和MDM2的基因和蛋白的表达.采用ELISA法检测各组HGF、IL-6、BFGF的表达.通过细胞生长曲线检测各组MSCs的增殖能力变化.通过裸鼠成瘤实验检测各组MSCs体内成瘤的能力.结果 第一部分：致MSCs瘤化相关因子筛选1.第4代纯化的MSCs形态均一,呈纤维细胞样.实验组共培养1周后MSCs细胞形态与对照组比较变化明显,细胞呈异型性,核质比增大.对照组细胞形态变化不明显.2.培养一周后实验组的p53 mRNA的相对表达量与对照组相比表达降低,两组间的差异有统计学意义(P＜0.01)；实验组的mdm2 mRNA相对表达量是对照组的1.56倍,两组间有显著差异(P＜0.01)；3.实验组大部分的细胞表达P53突变蛋白,达到87±5％,而对照组表达率0％(p＜0.01).实验组大部分的细胞表达MDM2,主要分布于细胞核,阳性率为90±7％,而对照组表达率为0％(p＜0.01).3.实验组的酪氨酸激酶信号分子HGF、IL-6水平与对照组和空白对照组比较表达水平升高(p＜0.01),而BFGF表达与对照组比较无明显的差异(p＞0.05)；对照组的HGF、IL-6、BFGF表达与空白对照组之间比较无明显的差异(p＞0.05).第二部分：IL-6促MSCs瘤化作用验证1.白介素6处理MSCs1个月后,实验组和对照组之间的生长曲线无明显的差异,而2个月后实验组MSC s生长接触抑制明显减弱,呈现肿瘤化.2.2个月后,实验组p53 mRNA及蛋白的相对表达量与对照组相比表达降低,两组间的差异有统计学意义(P＜0.01)；实验组mdm2 mRNA及蛋白的相对表达量与对照组表达明显升高(P＜0.01).4.接种3个月后,可见实验组裸鼠接种部位有肿块生长.实验组HE染色结果显示,接种部位可见大量无定形生长的肿瘤细胞,细胞排列紊乱,并伴有坏死.结论 体外模拟的肿瘤微环境中过量表达的致瘤性酪氨酸激酶信号分子促使MSCs获得肿瘤相关生物学特性且微环境中过量表达的IL-6促使MSCs发生恶性转化,且恶性转化的MSCs植入裸鼠体内能够形成肿瘤.
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